Chapitre 3 Séquençage; Introduction - illumina NextSeq 550Dx Guide De Référence De L'instrument

Chapitre 3 Séquençage

Introduction

Flux de travail de séquençage
Préparer la cartouche de réactifs
Préparer la Flow Cell
Préparer des librairies pour le séquençage
Configurer une analyse de séquençage
Surveiller la progression de l'analyse
Lavage automatique après analyse
Introduction
Pour effectuer une analyse de séquençage sur l'instrument NextSeq 550Dx, préparez une cartouche de
réactifs et une Flow Cell, puis suivez les indications du logiciel afin de configurer et de démarrer l'analyse.
La génération d'amplifiats et le séquençage sont effectués sur instrument. Après l'analyse, le lavage de
l'instrument commence automatiquement à l'aide des composants déjà chargés dans l'instrument.
Génération d'amplifiats
Lors de la génération d'amplifiats, les molécules d'ADN uniques sont liées à la surface de la Flow Cell, puis
subissent une amplification de façon à former des amplifiats.
Séquençage
L'imagerie des amplifiats est réalisée par chimie de séquençage à deux canaux et combinaison de filtres
propres à chacun des nucléotides marqués par fluorescence. Lorsque l'imagerie d'une plaque sur la
Flow Cell est terminée, le système passe à la plaque suivante. Ce processus se répète pour chaque cycle de
séquençage. Après l'analyse des images, le logiciel définit les bases, les filtre et leur attribue un score de
qualité.
Surveillez la progression et les statistiques de l'analyse à partir de l'interface du logiciel de commande, de
l'onglet Run (Analyse) dans BaseSpace ou d'un ordinateur en réseau utilisant le logiciel SAV (visualiseur
d'analyse de séquençage). Consultez la section
page 27.
Analyse
Pendant la progression de l'analyse, le logiciel de commande transfère automatiquement les fichiers de
définition des bases (BCL) vers BaseSpace ou l'emplacement de sortie indiqué pour l'analyse secondaire.
Plusieurs méthodes d'analyse sont disponibles en fonction de votre application. Pour plus de
renseignements, consultez l'aide de BaseSpace (help.basespace.illumina.com) .
Durée de l'analyse de séquençage
La durée de l'analyse de séquençage dépend du nombre de cycles réalisés. La longueur d'analyse
maximale correspond à une analyse à lecture appariée de 150 cycles par lecture (2 x 150), auxquels
s'ajoutent jusqu'à huit cycles pour chacune des deux lectures d'index.
Document nº 1000000041922 v01 FRA
Destiné à la recherche uniquement.
Ne pas utiliser dans le cadre d'examens diagnostiques.
Logiciel SAV (Visualiseur d'analyse de séquençage) ,
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