Table des Matières
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4. Dépannage
problème
Transfert incomplet
D es zones blanches ou
faible sur la membrane
Molécules ne migrent pas de gel Vérifiez toutes les connexions électriques.
•
p14
solution
Éliminer les poches d'air emprisonnées entre le gel et
la membrane lors de l'assemblage de la pile.
Tampon utilisation avec un faible force ionique.
Confirmer que le courant circule à travers l'empile-
ment de transfert.
Vérifier que le pH du tampon est proche du pH voulu.
La plupart des tampons ne devrait pas être ajustée.
Assurez-tampon frais.
Utilisation 3,5 mM SDS (0,1%) dans le tampon
de transfert.
Ajouter plusieurs autres feuilles de tampon-saturé
papier buvard de chaque côté du sandwich gel de
telle sorte que plus de tampon est présente au cours
du transfert.
Augmenter la période de transfert. De gros fragments
peuvent nécessiter une heure supplémentaire.
Ne pas utiliser la coloration ou la fixation des agents
sur le gel avant le transfert.
Utilisez un diluant de gel.
Réduire la concentration d'acrylamide gel.
Si vous utilisez une membrane de nitrocellulose non,
éviter d'inclure le méthanol dans le tampon de trans-
fert ou de réduire la quantité au minimum possible.
Utilisez la qualité de réactifs chimiques.
Augmenter la charge nette sur la protéine à l'aide
d'un tampon de transfert avec un pH différent. Abais-
ser le pH (<6-7) augmente la charge positive sur les
protéines; pH plus élevé (>6-7) augmente la charge
négative sur les protéines.
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