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Attention! L'acrylamide est une
neurotoxine. Toujours porter des
gants lorsque vous manipulez,
sous quelque forme et porter
un masque tout en pesant
la poudre. Jamais la bouche
pipeter la solution.
•
p30
Annexe A. Laemmli système gels
Tableau 4. Gels Laemmli - concentrations finales
gel de résolution empilement de gel d'électrophorèse
Acrylamide conc. 10% T*, 2,6% C
Tris-Cl
0,375 M
Tris-Glycine
pH
SDS
0,1%
APS
†
0,05% w/v
TEMED
‡
0,05% v/v
* Pour atteindre une autre concentration finale désirée, ajuster les
volumes d'achat d'actions d'acrylamide et de l'eau. Les volumes pour
les différentes concentrations sont indiquées dans le tableau 5.
†
Persulfate d'ammonium.
‡
Tétraméthyléthylènediamine
Le système de Laemmli est le protocole le plus
courant pour électrophorèse SDS-dénaturées proté-
ines. L'ion conduisant dans ce système tampon
discontinue est le chlorure et l'ion de fuite est la
glycine. Par conséquent, le gel de résolution et le
gel d'empilement contiennent Tris-Cl tampons (de
la concentration différente et pH), et le tampon
d'électrophorèse contient du Tris-glycine. Tous les
tampons contiennent 0,1% de SDS.
Composition de gel de polyacrylamide est indiqué par
deux pourcentages différents:
g(acrylamide + bisacrylamide)
%T =
g(bisacrylamide)
%C =
g(acrylamide + bisacrylamide)
Le pour cent total de l'acrylamide (% T) dans le gel
de résolution, qui peut varier de 4 à 20%, déter-
mine la taille des pores. Couramment, la quantité de
réticulant utilisé (% C) est de 2,6%. Dans le système
suivant exemple, la composition de gel de résolu-
tion est de 10% T, 2,6% de C, qui se traduit par
une taille de pore moyenne. La composition de gel
d'empilement est T 4%, 2,6% de C. Le T% dans le
gel d'empilement est inférieur à cause une taille plus
grande est requise des pores.
4% T, 2,6% C
0,125 M
8,8
6,8
0,1%
0,05 – 0,1% w/v
0,05 – 0,1% v/v
100 ml
tampon
0,025 M Tris base
0,192 M glycine
~8,3
0,1%
× 100
× 100
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