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La sonde HESI-II peut être utilisée en mode de polarité ions positifs ou négatifs. Le choix du mode
de polarité des ions est déterminé par la polarité des ions préformés dans la solution : les molécules
acides produisent des ions négatifs dans la solution, tandis que les molécules basiques forment des
ions positifs. L'éjection des ions de l'échantillon provenant des gouttelettes étant facilitée si la
charge ionique et la charge en surface ont une polarité similaire, utilisez le mode de polarité ions
positifs pour analyser des ions positifs, et le mode de polarité ions négatifs pour analyser des ions
négatifs.
Les ions d'échantillon peuvent transporter une ou plusieurs charges. Le nombre de charges
transportées par les ions d'échantillon varie en fonction de la structure de l'analyte étudié et du
solvant utilisé pour le transport. (En H-ESI, le tampon et la concentration de celui-ci ont un effet
significatif sur la sensibilité, c'est pourquoi il est important de choisir judicieusement ces variables.)
Dans le cas de protéines ou de peptides de masse moléculaire supérieure, le spectre de masse obtenu
comprend généralement une série de pics correspondant à une distribution d'ions analytes
multi-chargés.
La taille des gouttelettes, la charge de leur surface, la tension à la surface des gouttelettes, le degré
de volatilité du solvant et la force de solvatation des ions sont des facteurs qui affectent le procédé
H-ESI. Les gouttelettes de grande taille avec une tension de surface élevée, une faible volatilité, une
forte solvatation des ions, une charge en surface faible et une haute conductivité peuvent nuire à la
qualité de l'électrospray.
Les solvants organiques, tels que le méthanol, l'acétonitrile et l'alcool isopropylique sont préférables
à l'eau pour l'H-ESI. Les acides et bases volatils offrent de bons résultats, mais une concentration
saline supérieure à 10 mM et des acides et bases forts sont extrêmement corrosifs.
Pour une qualité d'électrospray optimale, respectez les règles suivantes :
• Évitez d'utiliser des sels.
• Utilisez des solvants organiques/aqueux et des acides et bases volatils.
• Optimisez le pH des solvants.
Le
Tableau 1
liquides avec une solution aqueuse à 50 pour cent. Ces réglages constituent un point de départ utile
pour l'optimisation des performances du système. Consultez le TSQ Series Getting Started Guide
(Guide de démarrage rapide) pour de plus amples informations sur l'optimisation des
performances de votre système.
Pour de meilleurs résultats, évitez d'utiliser la sonde HESI-II à des températures élevées sans apport
de solvant en provenance du système LC ou de la pompe seringue. Le fonctionnement de la sonde
HESI-II lorsque cette dernière est à cours de liquide peut occasionner le blocage de l'aiguille
métallique remplaçable (voir
Thermo Scientific
illustre les réglages initiaux de l'électrospray à chaud pour différents débits des
« Remplacement de l'insert d'aiguille »
1
à la
page
20).
Manuel d'utilisation de la sonde HESI-II
Introduction
3
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