problème
Échantillon coloré recueille:
Résolution bande Pauvre
Bleu de bromophénol ne pas affûter
dans une zone concentrée dans le
gel d'empilement
•
p16
solution
Près du front de tampon:
• Protéines ne sont pas suffisamment limité par le gel de
résolution, à augmenter le T.%
Près du sommet du gel lorsque le front de la mémoire
tampon a atteint le fond:
• La taille des pores de gel est trop petit. Diminuer la T% du
gel de résolution.
• La protéine a précipité. Chauffer l'échantillon à une
température inférieure (70 °C ou moins) pendant 1-2 min.
• Utiliser uniquement les réactifs de haute qualité.
• Effectuer la séparation à un niveau plus bas courant ou
tension.
• Dialyser ou dessaler l'échantillon.
• Réduire le volume d'échantillon ou de la concentration.
• N'utilisez l'urée fraîchement désionisée.
• Améliorer la dissociation des sous-unités par chauffage
échantillon dans un tampon d'échantillon SDS 1-2 minutes
à 100 °C.
• Ajouter plus mercaptoéthanol ou le dithiothréitol; vérifier
traitement de l'échantillon.
• Seulement utiliser des gels qui ont été récemment préparés.
• Des valeurs de pH de la séparation Vérifier et l'empilage
des solutions de gel. Ne reculez pas-titrage tampons.
La préparation des échantillons:
• Échantillons de chaleur pour pas plus de 1-2 minutes à
100 °C. Conservez-le sur la glace après le chauffage.
• Conserver l'échantillon sur la glace avant qu'il ne soit dénaturé.
• Ajouter inhibiteurs de la protéase, si nécessaire pour
prévenir la dégradation protéolytique de l'échantillon.
• Conserver les échantillons à congeler en portions aliquotes
pour éviter la congélation et la décongélation répétées.
(Conserver à -40 °C à -80 °C.)
• Versez un plus grand gel de stacking. (Pour de meilleurs
résultats, permettent une hauteur de gel d'empilement de
2,5 fois la hauteur de l'échantillon dans le puits.)
• Jeter des solutions d'acrylamide obsolètes et utiliser
uniquement le grade le plus élevé d'acrylamide.
• Lors de la préparation des échantillons, évitez d'utiliser
des solutions de sodium avec une haute concentration de
potassium ou.