Table des Matières
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Protéines
Le dosage des protéines dans la solution peut être aisément effectué en utilisant les
méthodes colorimétriques conjointement avec un spectrophotomètre UV/Visible. Un
certain nombre de méthodes est disponible, dont quatre sont incluses en tant
qu'options incorporées dans l'instrument; à noter que les longueurs d'onde utilisées
peuvent varier selon les kits des fabricants. Les méthodes UV génériques et les
informations concernant les protéines et les acides aminés sont également incluses.
Bradford
Cette méthode repose sur la quantification de la liaison d'un colorant, le bleu de
Coomassie, par rapport à une protéine inconnue et en comparant cette liaison avec
celle de différentes concentrations connues d'une protéine standard, habituellement
de l'albumine de sérum bovin (BSA). La méthode est conçue pour quantifier 1 à 10 µg
de protéine. Le dosage des protéines sur une plage de 10 à 100 µg peut être effectué
en augmentant de 5 fois les volumes de la solution de colorant et en utilisant des
éprouvettes plus grosses.
Lowry
La méthode Lowry repose sur la quantification de la couleur obtenue à partir de la
réaction du réactif phénolique Folin-Ciocalteu avec les résidus de tyrosyl d'une
protéine inconnue et en comparant cette couleur à celles dérivées d'une courbe
standard d'une protéine standard, habituellement du BSA à 750nm. Ce test est conçu
pour quantifier 1 à 20 µg de protéine. Les dosages des protéines sur une plage de 5 à
100 µg peut être effectué en augmentant de 5 fois tous les volumes et en utilisant des
éprouvettes plus grosses.
Biuret
Cette méthode repose sur la réaction entre les ions cuivriques et les liaisons
peptidiques dans une solution alcaline, résultant en la formation d'un complexe
absorbant à 546nm. La quantification est linéaire jusqu'à 130mg/ml quand
l'absorbance est mesurée après un temps de réaction normalisé, et la méthode peut
être appliquée aux analyses de routine de sérum et d'urine.
BCA
Cette méthode repose également sur la réaction entre les ions cuivriques et les
liaisons peptidiques mais, en plus, combine cette réaction à la détection des ions
cuivreux en utilisant de l'acide bicinchonique (BCA), donnant un maximum
d'absorbance à 562nm. L'analyse a une plage de travail de 1-2000 µg/ml.
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Français
Numéro 04 - 09/2002
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