Table des Matières
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Entrer la longueur d'onde du maximum d'absorption (nm) du fluorophore
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Entrer le Coefficient d'Extinction du fluorophore (l µmol
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Sauvegardez la méthode si nécessaire en utilisant 4
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Plusieurs fluorophores peuvent être étudiés si chacun est sauvegardé sous
une méthode individuelle.
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Insérez la référence et les échantillons, et appuyez sur run
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Si vous utilisez un porte-cuve simple
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Insérez la référence et appuyez sur set ref
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Insérez l'échantillon et appuyez sur run (répétez si nécessaire)
Après la mesure, le balayage va se mettre automatiquement à l'échelle. Typiquement,
le balayage va indiquer 2 pics, à 260nm pour ADNc et autour de celui du fluorogène
sélectionné (488, 550 et 650 nm pour la fluorescéine, Cy3 et Cy5, respectivement).
L'entraînement du tampon peut masquer le pic à 260 nm, et le rapport Abs260/Abs230
va être affecté. Si tel est le cas, il n'est alors pas possible de déterminer avec fiabilité
la quantité d'acide nucléique avec cette méthode. Toutefois, la détermination de la
concentration de fluorogène est toujours possible (voir Résultats, ci-dessous). Les
résultats pour la concentration d'ADNc (ng/µl), la concentration de colorant/sonde
(pmo/µl) et nucléotides/colorant sont présentés.
Résultats
Utilisez cette fonction pour visualiser les données d'absorbance sous-jacentes qui
donnent ces résultats, ainsi que les rapports d'absorbance et le rendement d'ADNc
(% et ng).
Si le rapport Abs260/Abs230 < 1.5, le pic à 260nm est médiocrement défini, et les
résultats qui utilisent Abs260 dans les calculs ne sont pas significatifs (concentration
d'ADNc, nucléotides/colorant, % rendement ADNc et ADNc total). Un rapport
Abs260/Abs230 bas peut être causé par les points suivants:
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entraînement du tampon, ou
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___
16
Français
-1
-1
cm
)
Numéro 04 - 09/2002
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