Table des Matières
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Nucléique
Mode
Facteur
ADN
50 ng/µl
ARN
40 ng/µl
Oligo
33 ng/µl
étiquette
50 ng/µl
ADNc
balayage
-
Tm
-
Info
-
Les acides nucléiques peuvent être quantifiés à 260 nm étant donné qu'il est bien
établi qu'une solution d'ADN ou d'ARN d'une densité optique de 1,0 possède une
concentration de 50 ou 40 µg/l, respectivement, dans une cuve d'un trajet optique de
10 mm. Les oligonucléotides, selon la méthode empirique, possèdent un facteur
correspondant de 33 µg/l, bien que cette valeur varie selon la composition de base.
Concentration = Abs260 * Facteur
L'extraction des acides nucléiques des cuves est accompagnée par celle des
protéines et la purification extensive est nécessaire pour séparer les impuretés
protéiques. Le rapport 260/280 donne une indication de la pureté ; il ne s'agit
cependant que d'une indication et non pas d'une évaluation définitive. Pour les
préparations d'ADN et d'ARN pures, on escompte des rapports ≥ 1.8 et ≥ 2.0,
respectivement; tout écart à partir de ces valeurs indique la présence d'impuretés
dans l'échantillon, mais il faut faire preuve de prudence quant à l'interprétation des
résultats. Une absorbance élevée à 230 nm peut également indiquer la présence
d'impuretés ; 230 nm est proche du maximum d'absorbance des liaisons peptidiques
et indique également la contamination du tampon étant donné que Tris, EDTA et
d'autres sels tampons absorbent à cette longueur d'onde. Lors de la mesure des
échantillons d'ARN, le rapport 260/230 doit être > 2,0 ; un rapport inférieur à ce
dernier indique généralement une contamination avec du thicyanate de guanidinium,
un réactif couramment utilisé dans la purification de l'ARN et qui absorbe sur une
plage de 230 – 260 nm. Un balayage de longueur d'onde d'un échantillon peut
________________________________________________________________
___
12
A260/A280
Usage
1.8
Quantification et contrôle de pureté d'ADN
2.0
Quantification et contrôle de pureté d'ARN
dépendant
Quantification et contrôle de pureté des
de la
oligonucléotides
séquence
Quantification par sonde PCR et ADNc
fluorescente pour micro-barrettes et études
d'hybridation in-situ, respectivement
-
Spectre des échantillons, ainsi que
quantification et contrôle de pureté des
longueurs d'onde sélectionnées
-
Calcul théorique de Tm pour une séquence de
bases de nucléotides
-
Informations concernant les acides nucléiques
Français
Numéro 04 - 09/2002
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