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ADNc
La mesure de l'efficacité de l'étiquetage des sondes ADNc à étiquette fluorescente
avant l'hybridation de micro-barrette à 2 couleurs permet de s'assurer qu'il y une
quantité suffisante de chaque sonde pour générer des signaux d'hybridation
satisfaisants. Ces données fournissent également la possibilité d'équilibrer les
intensités relatives de chaque colorant fluorescent en ajustant la concentration de
chaque sonde avant l'hybridation. Le rendement d'ADNc est mesuré à 260 nm tandis
que l'incorporation de fluorescéine, de Cy3 et de Cy5 est mesurée à leur pic
d'absorption. Cette méthode peut également être utile pour la mesure des rendements
et de la luminosité des sondes d'hybridation in-situ à étiquette fluorescente.
La procédure est la suivante:
Mise au point
•
Sélectionnez l'étiquette fluorogène à partir de la fluorescéine, de Cy3 / Cy5,
d'autre fluorophore en utilisant4
•
Choisissez si la correction de bruit de fond est exigée en utilisant 4
•
Si elle est sélectionnée, entrez la longueur d'onde exigée
•
Les valeurs par défaut sont 430nm pour Cy3/Cy5, 400nm pour la
fluorescéine et 410nm pour un autre fluorophore
•
Il est important qu'il n'y ait pas d'absorbance due à l'entraînement de
tampon ou d'autres composants à partir de l'étape de purification à la
longueur d'onde sélectionnée.
•
Entrez la quantité d'ARN de départ en ng (jusqu'à 99999)
•
L'ARN peut être quantifiée en utilisant les modes ARN ou Balayage
•
Entrez le facteur de dilution d'échantillon
•
Entrez le facteur de conversion ADNc à appliquer à l'Abs260
•
Entrez le volume de sonde en µl
Balayage
•
Choisissez si le balayage doit être activé; nous recommandons que le balayage
soit toujours activé.
•
Si oui
•
Entrez la longueur d'onde de départ et appuyez sur enter
•
N'allez en-dessous de 220nm que si vous utilisez des cuves en quartz
•
Entrez la longueur d'onde de fin et appuyez sur enter
•
Sélectionnez la vitesse de balayage, selon les besoins; lente, moyenne ou
rapide, en utilisant 4
•
Nous recommandons moyenne; observez que le graphe pour les
balayages lents et moyens est lissé.
Autre fluorophore
•
Entrer le nom du fluorophore en utilisant le clavier numérique
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Numéro 04 - 09/2002
Français
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