Publicité
Étalement, séparation ou déchirure
La perte de cellules sanguines à la surface de la lame au cours d'un cycle de coloration
peut se produire pour plusieurs raisons:
Fixation incorrecte à l'alcool
Si la phase de fixation à l'alcool du cycle échoue, il y a des pertes de cellules
lorsque les colorants sont appliqués. Vérifiez que la buse d'alcool fonctionne
correctement, avec une géométrie normale du spray et un volume de
pulvérisation normal (Section 6.2). Pour identifier un problème de fixation,
Frottis humides
fixez quelques lames de préparation dans du méthanol avant de les charger
dans le carrousel. Sélectionner un paramètre de fixation en augmentant sa
valeur (7, 8, ou 9).
Frottis humides
Le chargement de frottis sanguins humides dans le carrousel peut contribuer
au déchirement des frottis. Laissez les frottis sécher pendant plusieurs minutes
avant de commencer un cycle de coloration.
Frottis épais
Des frottis trop épais peuvent provoquer une séparation des frottis. Si une
partie du frottis a une section transversale épaisse, les cellules peuvent être
arrachées à la surface de la lame dans ces régions plus épaisses, tandis que les
régions « monocouches » plus minces restent utilisables. Mais les forts
déchirements qui commencent dans la zone épaisse peuvent aussi s'étendre
dans la monocouche.
Lames sales
Les lames sales sont une source majeure de perte de cellules pendant la
coloration. Nous vous recommandons fortement d'utiliser des lames neuves de
qualité supérieure.
Même avec des lames de qualité supérieure, une perte aléatoire peut survenir
en raison de la qualité insuffisante de la surface de la lame. Lorsque la
coloration fonctionne bien, la qualité des lames est à l'origine de la plupart des
problèmes de perte de cellules.
Artéfacts de globules rouges
Des corps réfringents ou des inclusions (apparaissant sous forme d'objets
annelés sombres sur les globules rouges) proviendraient de la présence d'eau
lors de la fixation. Souvent appelé « goutte d'eau », cet effet est commun dans
la coloration de Romanowsky. Le méthanol utilisé pour la fixation doit être
anhydre (maximum 0,5 % d'eau).
Le méthanol qui est exposé à l'atmosphère absorbe une quantité considérable
d'eau, en particulier lorsque l'humidité relative est élevée. La première parade
pour éviter les taches d'eau est de s'assurer que le méthanol utilisé pour la
fixation des frottis ne contient pas d'eau. En cas de doute, remplacez-le par un
réactif identifié comme anhydre.
RÉSOLUTION DES PROBLÈMES
7.2 Résultats anormaux de coloration
S E C T I O N 7
81
Publicité
