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Préparation d'une solution de colorant Rhodamine WT
La solution de colorant rhodamine WT doit être utilisée pour effectuer un étalonnage en deux points. Achetez la
rhodamine WT en solution à 2,5 % en suivant la procédure ci-dessous. Kingscote Chemicals (Miamisburg, OH,
1-800-394-0678) a toujours eu une solution à 2,5 % (article n°106023) qui fonctionne bien avec cette procédure.
Notez qu'il existe de nombreux types de rhodamine - assurez-vous que Rhodamine WT est sélectionné. Si une
solution à 2,5 % ne peut être obtenue commercialement, la préparer à partir d'une solution solide ou d'une autre
concentration d'une solution liquide à une concentration finale de 2,5 %, ou ajustez les dilutions ci-dessous en
conséquence. Il devrait être conservé au réfrigérateur lorsqu'il n'est pas utilisé.
Pour l'étalonnage des canaux PC et chlorophylliens, une solution de rhodamine WT à 0,625 mg/L doit être préparée.
Pour l'étalonnage du canal PE, une solution de rhodamine WT à 0,025 mg/L doit être préparée. Les étapes ci-dessous
décrivent une procédure pour préparer ces solutions.
1. Pour tout étalonnage du capteur TAL, préparer une solution de Rhodamine WT à 125 mg/L. Transférez 5,0 mL
de la solution de Rhodamine WT à 2,5 % dans une fiole jaugée de 1000 mL. Remplissez la fiole jusqu'au trait de
jauge avec de l'eau désionisée ou distillée et bien mélanger pour obtenir une solution d'environ 125 mg/L de
Rhodamine WT. Transférez dans une bouteille de stockage et la conserver pour une utilisation ultérieure.
*Cette solution peut être conservée au réfrigérateur (4 °C). Sa dégradation dépendra de l'exposition
à la lumière et des cycles de réchauffement répétés, mais les solutions utilisées 1 à 2 fois par an
peuvent être conservées jusqu'à deux ans. Les utilisateurs devraient mettre en œuvre leurs propres
procédures pour se prémunir contre la dégradation.
2. Pour l'étalonnage des canaux PC et chlorophylliens, préparer une solution de 0,625 mg/L de Rhodamine WT.
Transférez 5,0 mL de la solution de 125 mg/L préparée à la première étape dans une fiole jaugée de 1000 mL.
Remplissez la fiole jusqu'au trait de jauge avec de l'eau désionisée ou distillée. Bien mélanger pour obtenir une
solution à 0,625 mg/L de Rhodamine WT. Utilisez cette solution dans les 24 heures suivant la préparation et
jetez-la après usage.
3. Pour l'étalonnage du canal PE, préparer une solution de rhodamine WT à 0,025 mg/L. Transférez 0,2 mL
de la solution de 125 mg/L préparée à la première étape dans une fiole jaugée de 1000 mL. Remplissez la
fiole jusqu'au trait de jauge avec de l'eau désionisée ou distillée. Bien mélanger pour obtenir une solution
à 0,025 mg/L de Rhodamine WT. Utilisez cette solution dans les 24 heures suivant la préparation et jetez-la
après usage.
En plus de préparer la ou les solutions de rhodamine, il est également nécessaire de déterminer les valeurs
d'étalonnage compensées en température des solutions. En général, la fluorescence est inversement liée à la
température. Mesurez la température de la ou des solutions de rhodamine et utilisez la température de la solution au
moment de l'étalonnage pour sélectionner les concentrations de la solution compensée, soit en RFU (recommandé),
soit en µg/L d'équivalent pigment, dans le tableau ci-dessous.
Par exemple, supposons que vous étalonnez le canal chlorophyllien dans le RFU et que la température mesurée dans
la solution de rhodamine WT à 0,625 mg/L est de 22 °C. La première valeur standard entrée sera 0 et la deuxième
valeur standard sera 16,4
pour étalonner la chlorophylle, la deuxième valeur standard serait 66 dans cet exemple. L'utilisation de la même
solution de rhodamine WT à 0,625 mg/L pour étalonner le canal PC donnera une deuxième valeur standard de
16,0 RFU ou 16 µg/L. Ces valeurs sont entrées lors d'un étalonnage en 2 points.
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(voir tableau page
41). De même, si vous avez l'intention d'utiliser l'unité par défaut µg/L
Étalonnage
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