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Sélection du tampon d'électrophorèse
Le tampon TAE offre une résolution optimale des fragments de plus de 4 kb de longueur, tandis que le tampon TBE doit être
sélectionné pour les fragments de 0,1 à 3 kb. Le TBE a une plus grande capacité tampon et une conductivité plus faible que le TAE
et doit donc être utilisé pour l'électrophorèse à haute tension. D'autre part, le tampon TBE produit moins de chaleur que le TAE à
une tension équivalente et empêche les dérives importantes de pH. Voir la page 14 pour consulter la liste des tampons pour les
applications d'électrophorèse d'ADN.
Remarque : En raison de sa capacité tampon inférieure, le TAE peut nécessiter une circulation ou un mélange de temps à autre pour
réaliser des électrophorèses sur toute la longueur, en particulier à des tensions élevées.
Température
L'électrophorèse à haute tension produit de la chaleur. D'autre part, les tampons à haute conductivité tels que le TAE produisent
davantage de chaleur que les tampons à faible conductivité. Pour les électrophorèses en gel d'agarose avec des tensions supérieures
à 175 V, des précautions doivent être prises car l'accumulation de chaleur est susceptible de produire des artefacts dans le gel
(notamment des fronts de migration en S) et les électrophorèses longues peuvent même faire fondre le gel d'agarose. Les gels
d'agarose avec un point de fusion faible ne doivent pas être utilisés pour les migrations à haute tension.
Visualisation d'ADN
Pour établir la progression d'ADN double brin, du bromure d'éthidium (0,5 µg/mL) est souvent ajouté au tampon de migration (voir la
page 18 pour une liste des produits de bromure d'éthidium). Les propriétés de fluorescence du colorant permettent de visualiser la
bande sous une lampe UV. Cependant, le bromure d'éthidium peut réduire la vitesse de migration de l'ADN d'environ 15 %. Autrement,
après l'électrophorèse, le gel peut être marqué dans une solution de bromure d'éthidium (H
puis visualisé ou photographié avec un transilluminateur à UV. Remarque : La durée de marquage doit être minimisée pour éviter que
de petits fragments d'acide nucléique ne diffusent hors du gel.
La fluorescence de fond du bromure d'éthidium non lié peut être minimisée en éliminant le marquage par un trempage du gel pendant
5 minutes dans du MgCI 2 à 0,01 M, ou pendant 30 minutes dans de l'eau déionisée.
ATTENTION !
Le bromure d'éthidium est un mutagène avéré. Des gants doivent toujours être portés pour le manipuler. Porter des lunettes de
sécurité UV et protéger la peau avant d'utiliser toute source de lumière UV.
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MANUEL D'INSTRUCTIONS
Unités d'électrophorèse horizontale, format large
www.eu.fishersci.com/fisherbrand
O à 0,5 µg/mL) pendant 15 à 60 minutes,
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