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SECTION 7
RÉSOLUTION DES PROBLÈMES
7.2 Résultats de coloration anormaux
Altération des frottis
Des cellules sanguines peuvent se détacher de la surface des lames lors du cycle de coloration
pour plusieurs raisons :
Frottis sanguins
humides
Fixation à l'alcool incorrecte
Si la phase de fixation à l'alcool ne se déroule pas correctement, des cellules se
détacheront lors de l'application du colorant. Vérifiez que la buse de l'alcool
fonctionne adéquatement, c'est-à-dire que le motif et le volume de pulvérisation
sont normaux (Sections 6.4 et 6.5). Pour identifier le problème en tant qu'échec de
fixation, fixez certaines lames d'échantillon au méthanol avant de les charger dans
le carrousel. Ajustez le paramètre de fixation de façon à augmenter la fixation (7, 8
ou 9).
Frottis sanguins humides
Le chargement de frottis sanguins encore humides dans le carrousel peut contribuer
à l'altération des frottis. Laissez les frottis sanguins sécher pendant plusieurs minutes
avant de commencer un cycle de coloration.
Frottis sanguins épais
Les frottis sanguins de trop grande épaisseur peuvent provoquer le détachement des
frottis. Si le frottis sanguin présente une section transversale cunéiforme épaisse, des
cellules peuvent se détacher de la surface de la lame dans les régions épaisses, tandis
que les régions monocouches plus fines restent exploitables. Le détachement
important de cellules dans une région épaisse peut également entraîner le
détachement de cellules dans une région monocouche.
Lames sales
Les lames sales sont une source majeure de détachement de cellules lors de la
coloration. Nous recommandons fortement l'utilisation de lames neuves, de
bonne qualité.
Même avec des lames de qualité supérieure, un détachement occasionnel de cellules
peut survenir du fait de la qualité inadéquate de la surface des lames. Lorsque le
colorateur fonctionne correctement, la qualité des lames est responsable de la
majorité, voire de la totalité, des problèmes de détachement de cellules.
Artefacts liés aux érythrocytes
On pense que les corps ou inclusions réfrangibles (visibles sous la forme d'objets
annelés sombres sur les érythrocytes) sont dus à la présence d'eau lors de la fixation.
Souvent appelé « tachage par eau », cet effet est courant lors de la coloration de
Romanowsky. Le méthanol utilisé pour la fixation doit être anhydre (teneur en eau
égale ou inférieure à 0,5 %).
Au contact de l'air, le méthanol absorbe une quantité importante d'eau, en
particulier lorsque l'humidité relative est élevée. La première action de prévention
du tachage par eau consiste à vérifier que le méthanol utilisé pour la fixation des
frottis sanguins est dépourvu d'eau. En cas de doute, remplacez-le par un réactif
connu pour son caractère anhydre.
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