Présentation De L'appareil Et Usage Prévu - Agilent Technologies Seahorse XF Pro Manuel D'utilisation

Présentation de l'appareil et usage prévu
L'analyseur Agilent Seahorse XF Pro permet de mesurer les variations de pH et
du taux d'oxygène dissous dans le milieu en contact immédiat avec des cellules
mises en culture dans une microplaque. Les modifications du milieu extracellulaire
sont dues à la consommation ou à la production d'analytes par les cellules.
Des mesures sensibles des flux observés dans le milieu peuvent être donc utilisées
pour déterminer le taux métabolique des cellules avec précision et de façon
non-invasive, sans marqueur.
Une caractéristique unique de la technologie XF est sa capacité à effectuer des
mesures précises et reproductibles en seulement cinq minutes. L'appareil, qui
fonctionne avec une cartouche de détection, permet de prélever quelques µl de
milieu au-dessus de la monocouche cellulaire. Le métabolisme cellulaire provoque
des modifications rapides de ce micro-environnement, qui sont faciles à mesurer
dans un petit volume.
Une cartouche de détection XF est nécessaire pour effectuer une analyse.
La cartouche est composée de 96 sondes, et chacune de ces sondes dispose
d'un capteur multifluor sensible à la fois à la concentration en protons et en
oxygène. Le système mesure la concentration de chaque analyte au cours du
temps puis calcule automatiquement le taux de consommation d'oxygène (OCR)
et le taux de libération de protons (PER), qui est une mesure quantitative du taux
d'acidification extracellulaire (ECAR). Ces mesures sont effectuées simultanément
dans tous les puits de la microplaque.
Un cycle de mesure est généralement effectué en 6 minutes. Le milieu est mélangé
avec précaution, la sonde est placée à 200 µm au-dessus du fond du puits, et les
mesures de taux d'analytes sont effectuées.
Les taux métaboliques de base sont généralement mesurés trois ou quatre fois
puis sont exprimés en pmol/min pour la mesure de l'OCR, en mpH/min pour la
mesure de l'ECAR et en pmol/min pour la mesure du PER. Le composé est ensuite
ajouté et mélangé dans le milieu, puis l'OCR et l'ECAR sont mesurés de façon
répétée après traitement. Le changement de voie métabolique par les cellules
entraîne une variation de la relation entre l'OCR et l'ECAR/PER.
Le système XF Pro, composé d'un analyseur de paillasse et d'un contrôleur à écran
tactile, est piloté par le logiciel Agilent Seahorse Wave Pro. Ce logiciel permet
d'effectuer l'ensemble des étapes des analyses Seahorse XF, notamment la
configuration de l'analyse, le pilotage de l'appareil et le traitement des données.
Manuel d'utilisation Analyseur Seahorse XF Pro
Présentation de l'appareil et usage prévu
Introduction 1
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