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Définir le facteur 2 à 0.00 pour une mesure directe de protéine sous UV à 280 nm. Le
facteur 1 est basé sur le coefficient d'extinction de la protéine. Si le sérum-albumine bovin
(SAB) est un standard acceptable, définir le facteur 1 à 1,115 afin d'obtenir des résultats
linéaires de 0 à 0,8 mg/ml de protéine.
Protéine (mg/ml) = 1,115 × A280
Des mesures rapides telles que celle-ci à 280 nm sont particulièrement utiles après isolement
des protéines et des peptides des mixtures, respectivement par centrifugation et gravité.
Détermination des protéines à 595, 546, 562 et
750 nm
La méthode Bradford consiste à quantifier l'attachement d'un colorant (le bleu brillant de
Coomassie) à une protéine inconnue et à comparer cet attachement à celui de différentes
concentrations connues d'une protéine standard à 595 nm, en général du sérum-albumine
bovin (SAB).
La méthode Biuret repose sur la réaction entre des ions cupriques et des liaisons peptidiques
dans une solution alcaline, ce qui provoque la formation d'un complexe absorbant à 546 nm.
La méthode BCA repose elle aussi sur la réaction entre des ions cupriques et des liaisons
peptidiques, mais elle combine cette réaction avec la détection de ions cuivreux à l'aide
d'acide bicinchoninique (BCA), ce qui permet d'obtenir une absorbance maximale à 562 nm.
Le procédé BCA est moins sensible à la présence des détergents utilisés pour briser les parois
cellulaires.
La méthode Lowry consiste à quantifier la couleur obtenue par la réaction entre le réactif au
phénol de Folin-Ciocalteu avec les résidus de tyrosine d'une protéine inconnue et à la
comparer à celles obtenues à partir d'une courbe standard d'une protéine standard à 750 nm,
en général du sérum-albumine bovin.
Des protocoles détaillés sont fournis avec ces kits d'essai. Ils doivent être respectés
•
scrupuleusement pour obtenir des résultats précis.
•
Il est conseillé d'utiliser des cellules jetables en plastique. Pour utiliser un étalon à la
concentration zéro, inclure celui-ci dans le nombre d'étalons à utiliser et saisir la valeur
0.00 pour la concentration. L'utiliser ensuite pour indiquer l'étalon 1.
•
Une analyse de régression linéaire des points de données standard d'étalonnage est
calculée. Son résultat et le coefficient de corrélation peuvent être imprimés. Un
coefficient de corrélation compris entre 0,95 et 1,00 indique une bonne linéarité.
Méthodes pour les protéines
Protéines UV
Cette méthode fait appel à l'analyse de Christian et Warburg.
La procédure est la suivante :
1. Presser la touche 2 pour ouvrir le dossier Sciences de la vie (Lambda Bio+ uniquement).
Méthodes fournies avec l'instrument . 87
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