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102 . Lambda Bio/Bio+ Mode d'emploi
Mesure de cultures cellulaires bactériennes
(DO 600)
La culture de cellules bactériennes est en général menée jusqu'à ce que l'absorbance à
600 nm (appelée DO 600) atteigne environ 0,4 A avant induction ou récolte. Il existe une
relation linéaire entre le nombre de cellules (densité) et la DO 600 jusqu'à 0,6 A environ.
Il est important de noter que pour des échantillons turbides comme les cultures cellulaires,
l'absorbance mesurée provient de la dispersion lumineuse, et non de l'absorption moléculaire.
L'importance de la dispersion varie selon le circuit optique du système (distance entre le
porte-cellule et la fente de sortie de l'instrument, géométrie de cette fente et optique du
monochromateur. Des types de spectrophotomètres différents donneront donc des réponses
différentes pour un même échantillon turbide. Il n'est possible de comparer les résultats que
s'ils sont normalisés à l'aide de courbes d'étalonnage.
Une courbe d'étalonnage peut être déterminée en comparant la DO 600 mesurée à la
DO 600 attendue. Cette dernière est déterminée en comptant le nombre de cellules avec une
autre technique (par exemple, lame porte-objet de microscope) et en la convertissant en
DO 600 à partir de la règle suivante : 1 DO 600 = 8 × 10
L'instrument Lambda Bio/Bio+ est doté d'une optique de beaucoup plus faible taille que celle
de la plupart des spectrophotomètres traditionnels, et une plus grande quantité de lumière
est transmise au détecteur, ce qui produit des valeurs de DO 600 plus basses qu'attendu. Les
résultats obtenus en comparant la DO 600 mesurée à la DO 600 attendue (voir ci-dessus)
indiquent qu'il est nécessaire de prendre en compte un facteur de correction de 2,0 pour que
les données soient comparables à celles d'instruments de plus grande taille. Ce facteur est
intégré dans la configuration par défaut, mais il est possible de le modifier.
Pour les mesures de densité optique de solutions de cultures cellulaires, il est recommandé
d'utiliser des cellules jetables ayant un trajet optique de 10 mm. De même, il est conseillé
d'ajouter de la glycérine à l'échantillon afin d'empêcher la suspension de sédimenter trop
rapidement, produisant une DO variant avec le temps.
La procédure est la suivante :
1. Presser la touche 2 pour ouvrir le dossier Sciences de la vie (Lambda Bio+ uniquement).
2. Si l'instrument est un Lambda Bio, presser la touche 5 pour sélectionner le mode
DO 600.
OU
Si l'instrument est un Lambda Bio+, presser la touche 3 pour sélectionner le mode
DO 600.
L'écran DO 600 – Paramètres s'affiche.
8
cellules/ml pour E. Coli.
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