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86 . Lambda Bio/Bio+ Mode d'emploi
Détermination des protéines
L'instrument Lambda Bio/Bio+ comporte cinq méthodes pour l'analyse des protéines
(Figure 13).
Figure 13 L'écran des méthodes pour les protéines
Détermination des protéines à 280 nm
La concentration de protéines peut être déterminée dans le proche UV à 280 nm, grâce à
l'absorbance par les acides aminés tyrosine, tryptophane et phenylalanine. L'absorbance à
280 nm varie en proportions importantes pour différentes protéines, en fonction de leur
teneur en acides aminés. Il est donc nécessaire de déterminer la valeur d'absorbance
spécifique d'une protéine particulière.
La présence d'acide nucléique dans la solution de protéines peut avoir un effet important, en
raison de la forte absorbance des nucléotides à 280 nm. Cet effet peut être compensé en
mesurant l'absorbance à 260 nm (A260), puis en appliquant l'équation de Christian et
Warburg pour l'enolase de levure cristalline (
Protéine (mg/ml) = 1.55 × A280 − 0.76 × A260
Autrement dit :
Concentration de protéine = (Facteur 1 × A280) − (Facteur 2 × A260)
Cette équation peut être appliquée à d'autres protéines si les facteurs correspondants sont
connus. L'instrument détermine la concentration de protéine à 280 nm et applique par défaut
l'équation ci-dessus. Il est possible de modifier les facteurs, et l'utilisation de la correction de
fond à 320 nm est facultative.
Pour adapter l'équation à une protéine particulière, il est nécessaire de déterminer les valeurs
d'absorbance à 260 et 280 nm pour des concentrations de protéine connues, afin de produire
des équations simultanées simples. On obtiendra ainsi les deux coefficients. S'il apparaît que
le facteur 2 est négatif, il est conseillé de le mettre à zéro puisque ce résultat indique une
absence de contribution à la concentration de protéine due à l'absorbance à 260 nm.
Biochemische Zeitung
, 1941, 310, 384) :
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