Table des Matières
Publicité
Méthodes fournies avec l'instrument . 73
Caractérisation ADN, ARN et oligonucléotides
Introduction
L'instrument Lambda Bio/Bio+ comporte trois méthodes pour la quantification des acides
nucléiques.
Figure 11 Ecran Acides nucléiques du Lambda Bio+
Quantification d'acides nucléiques (QAN)
Il est possible de quantifier les acides nucléiques à 260 nm, car une solution d'ADN ou d'ARN
dans une cellule ayant un trajet optique de 10 mm avec une densité optique de 1.0 offre une
concentration de 50 µg/ml ou 40 µg/ml, respectivement. Les oligonucléotides ont un facteur
correspondant de 33 µg/ml, bien que celui-ci varie avec la composition de base. Il est
possible de le calculer si la séquence de base est connue :
Concentration = A260 × Facteur
Par défaut, l'instrument utilise les facteurs 50, 40 et 33 respectivement pour l'ADN, l'ARN et
les oligonucléotides, et compense la dilution et l'utilisation de cellules ayant un trajet optique
différent de 10 mm. Le facteur de dilution et le trajet optique de la cellule peuvent être
indiqués. Avec la méthode Oligo, il est possible de calculer le facteur des bases composites
en indiquant les proportions des 4 bases.
Vérification de pureté des acides nucléiques
Une purification intensive est nécessaire pour séparer les impuretés des protéines des acides
nucléiques extraits des cellules. Le rapport A260/A280 fournit une indication de la pureté,
mais ce n'est qu'une indication, pas une évaluation définitive. Les préparations d'ADN et
d'ARN pures doivent présenter respectivement des rapports ≥1.8 et ≥2.0. Toute déviation de
ces valeurs signale la présence d'impuretés dans l'échantillon, mais on veillera avec soin à
l'interprétation des résultats.
Publicité
Table des Matières
