Table des Matières
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10.3
Protocole standard
Lors de l'utilisation du kit d'extraction d'ADN oCheck
vide, un système de vide approprié est nécessaire. L'équipement nécessaire, ainsi que l'installation
et les instructions de travail, sont décrits dans le chapitre 9.
10.3.1 Préparation
Vérifier que la centrifugeuse est réglée sur la température ambiante (de 18 à 25 °C).
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Préparer les échantillons conformément au chapitre 10.2.
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Régler les blocs chauffants ou les bains-marie sur 56 °C et 70 °C, respectivement.
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Avant élution, incuber le tampon E d'élution fourni à 70 °C.
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S'assurer que les solutions de travail ont été préparées conformément au chapitre 10.1.
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10.3.2 Pré-lyse
Ajouter 80 μl de tampon L1.
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Ajouter 2,4 μl de la solution ARN porteur préparée.
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Ajouter 20 μl de solution de protéinase K.
➠
Fermer le bouchon et mélanger brièvement à l'aide d'un vortex.
➠
!
En cas de traitement de plusieurs échantillons, la protéinase K, le tampon L1 et l'ARN porteur doivent
être prémélangés directement avant l'emploi. Ne jamais mélanger le tampon L1 et la protéinase K plus de
10 à 15 minutes avant de les ajouter à l'échantillon. La protéinase K a tendance à s'auto-digérer dans le
tampon L1 sans substrat.
Incuber à 56 ºC pendant au moins 30 minutes. Agiter les échantillons à l'aide d'un thermomixer
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à 650 rpm. Lors de l'utilisation d'un bloc chauffant ou d'un bain-marie, agiter de temps à autre
les échantillons à l'aide d'un vortex tout au long de la période d'incubation.
10.3.3 Lyse
Centrifuger brièvement le microtube afin d'éliminer les gouttes qui se trouvent à l'intérieur du
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bouchon.
Ajouter 250 μl de tampon L4.
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Fermer le bouchon et mélanger à l'aide d'un vortex pendant 10 secondes.
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Incuber à 70 ºC pendant 15 minutes.
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Fermer hermétiquement le bouchon des microtubes afin d'éviter une ouverture accidentelle des
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bouchons.
10.3.4 Ajustement des conditions de fixation de l'ADN
Centrifuger brièvement le microtube afin d'éliminer les gouttes qui se trouvent à l'intérieur du
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bouchon.
Ajouter 300 μl d'éthanol (p.a. ≥ 99,8 %) à l'échantillon.
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Fermer immédiatement le bouchon et mélanger à l'aide d'un vortex pendant 15 secondes.
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Centrifuger brièvement le microtube afin d'éliminer les gouttes qui se trouvent à l'intérieur du
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bouchon.
oCheck
Kit d'extraction d'ADN - Instructions d'utilisation
®
Révision 00 / Février 2011
- Préparation en barrette de 8 colonnes - sous
®
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