Table des Matières
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8.3
Protocole standard
8.3.1
Préparation
Vérifier que la centrifugeuse est réglée sur la température ambiante (de 18 à 25 °C).
➠
Préparer les échantillons conformément au chapitre 8.2.
➠
Régler les blocs chauffants ou les bains-marie respectivement sur 56 °C et 70 °C.
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Avant élution, incuber le tampon E d'élution à 70 °C.
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S'assurer que les solutions ont été préparées conformément au chapitre 8.1.
➠
8.3.2
Pré-lyse
Ajouter 80 μl de tampon L1.
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Ajouter 2,4 μl de la solution d'ARN porteur préparée.
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Ajouter 20 μl de solution de protéinase K.
➠
Fermer le bouchon et mélanger brièvement à l'aide d'un vortex.
➠
Incuber à 56 ºC pendant au moins 30 minutes. Agiter les échantillons à l'aide d'un thermomixer
➠
à 650 rpm. Lors de l'utilisation d'un bloc chauffant ou d'un bain-marie, agiter de temps en temps
les échantillons à l'aide d'un vortex.
!
En cas de traitement de plusieurs échantillons, la protéinase K, le tampon L1 et l'ARN porteur doivent
être prémélangés directement avant l'emploi. Ne jamais mélanger le tampon L1 et la protéinase K plus
de 10 à 15 minutes avant de les ajouter à l'échantillon. La protéinase K s'auto-digère dans le tampon L1
sans substrat.
8.3.3
Lyse
Centrifuger brièvement le microtube afin d'éliminer les gouttes qui se trouvent à l'intérieur du
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bouchon.
Ajouter 250 μl de tampon L4.
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Fermer le bouchon et mélanger à l'aide d'un vortex pendant 10 secondes.
➠
Incuber à 70 ºC pendant 15 minutes.
➠
!
Fermer hermétiquement le bouchon des microtubes afin d'éviter une ouverture accidentelle des bouchons.
8.3.4
Ajustement des conditions de fixation de l'ADN
Centrifuger brièvement le microube afin d'éliminer les gouttes qui se trouvent à l'intérieur du
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bouchon.
Ajouter 300 μl d'éthanol (p.a. ≥ 99,8 %) à l'échantillon.
➠
Fermer immédiatement le bouchon et mélanger à l'aide d'un vortex pendant 15 secondes.
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Centrifuger brièvement le microtube afin d'éliminer les gouttes qui se trouvent à l'intérieur du
➠
bouchon.
oCheck
Kit d'extraction d'ADN - Instructions d'utilisation
®
Révision 00 / Février 2011
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