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Tampons d'électrophorèse
4. Ajoutez du bromure d'éthidium au tampon d'électrophorèse dilué à
REMARQUE : L'ajout de bromure d'éthidium au gel et au tampon d'analyse
5.
N° de référence
Description des peignes
E0167
1 mm, 14 dents
E0167
1 mm, 28 dents
E0168
1 mm, 5 dents
E0168
1 mm, 8 dents
Les deux tampons les plus fréquemment utilisés pour
l'électrophorèse horizontale de l'ADN double brin dans des gels
d'agarose sont Tris-Acétate-EDTA (TAE) et Tris-Borate-EDTA
(TBE). Même si les puissances de séparation de ces tampons sont
très similaires, les capacités relatives des tampons sont très
différentes, conférant différents attributs du cycle, lesquels sont
résumés ci-dessous :
TAE : Le Tris-acétate est généralement le tampon le plus
fréquemment utilisé. Néanmoins, sa capacité de tampon
relativement faible s'épuisera pendant une électrophorèse
longue, rendant nécessaire une recirculation de tampon
dans les cycles dépassant 140 mA-heures. Les avantages
potentiels liés à l'utilisation d'un tampon TAE par rapport à
un tampon TBE incluent une meilleure séparation de l'ADN
super-enroulé et une migration plus rapide d'environ 10 %
des fragments d'ADN linéaire double brin
TBE : La capacité de tampon significativement supérieure de Tris-
borate et sa consommation relativement basse en courant
éliminent la nécessité de recirculation dans pratiquement
tous les cycles prolongés (> 300 mA-heures). Les systèmes
à tampon TBE ne sont pas recommandés lorsque des
fragments doivent être récupérés dans le gel après
l'électrophorèse.
une concentration finale de 0,5 µg/ml.
permet des taux de détection optimaux en fournissant des
niveaux élevés de fluorescence des échantillons avec un taux
uniformément bas de substratum.
Ajoutez 6,6 ml du tampon d'électrophorèse 1X contenant de
l'éthidium fabriqué dans l'étape 4 par millimètre d'épaisseur de gel
souhaitée, jusqu'à 100 ml au maximum, dans la fiole contenant
l'agarose. Une solution de gel de 100 ml permettra d'obtenir un gel
de 7,6 mm d'épaisseur. Des gels plus épais peuvent être réalisés.
Néanmoins, il faut prendre garde à ce que les puits soient
suffisamment profonds pour accueillir le volume d'échantillon
souhaité
.
Largeur des puits
Volume d'échantillon 1 mm
5 mm
2,5 mm
8 mm
4 mm
(1)
.
5 µl
2,5 µl
8 µl
4 µl
4
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