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Bio-tests
Mesure des protéines
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Manuel d'utilisation du BioMate 3S
Pierce micro BCA (Micro-méthode BCA de Pierce) – Ce test est une formulation d'acide
bicinchoninique compatible aux détergents qui permet la détection colorimétrique et la
quantification totale des protéines. Adaptation du test BCA, la micro-méthode BCA a été
optimisée pour être utilisée avec des échantillons de protéines diluées (0,5 μg/ml à 20 μg/ml).
La méthode préprogrammée utilise une longueur d'onde d'analyse de 562 Nm et intègre des
standards préprogrammés dont la plage de concentration se situe entre 0,2 μg/ml et
200 μg/ml.
Biuret – Le test de Biuret est similaire au test de Lowry ; toutefois, il implique une seule
incubation et nécessite une plus grande quantité de protéines pour l'analyse. Pendant le test,
un complexe de coloration pourpre, mesuré à 545 Nm, se forme en présence de protéines. La
courbe d'étalonnage est linéaire pour ce test et se compose de standards dont la plage de
concentration se situe entre 2 μg/ml et 10 μg/ml.
Protein Conc. (280) [Conc. de protéines (280)] – Cette méthode directe, qui permet de
déterminer la concentration des protéines, mesure l'absorbance de l'échantillon à 280 Nm.
Cette méthode de test mesure l'absorption des longueurs d'onde fixes à 280 Nm et détermine
la concentration des protéines en multipliant cette valeur par un facteur (1 par défaut). La
concentration des protéines obtenue est exprimée en mg/ml. Une correction du spectre de
fond à 320 Nm est disponible en option pour corriger les décalages de spectre dus à la
diffusion par les impuretés. Un utilitaire de facteur de dilution peut être utilisé pour calculer la
concentration de la solution mère.
Protein Conc. (205) [Conc. de protéines (205)] – Cette méthode directe, qui permet de
déterminer la concentration des protéines, mesure l'absorbance de l'échantillon à 205 Nm.
Cette méthode de test mesure l'absorption des longueurs d'onde fixes à 205 Nm et détermine
la concentration des protéines en multipliant cette valeur par un facteur (31 par défaut). La
concentration des protéines obtenue est exprimée en mg/ml. Une correction du spectre de
fond à 320 Nm est disponible en option pour corriger les décalages de spectre causés par la
diffusion par les impuretés. Un utilitaire de facteur de dilution peut être utilisé pour calculer la
concentration de la solution mère.
Warburg-Christian – La méthode de Warburg-Christian permet de déterminer la
concentration des protéines en présence de la concentration d'acides nucléiques. L'absorbance
à 280 nm est principalement due aux chaînes latérales aromatiques des synthons acides aminés
de protéines. Les acides nucléiques montrent une absorption élevée à 260 nm ; par
conséquent, une formule simple peut être utilisée pour estimer la concentration des protéines
tout en soustrayant la contribution en acides nucléiques. La concentration des protéines
obtenue est exprimée en mg/ml. Une correction du spectre de fond à 320 Nm est disponible
en option pour corriger les décalages de spectre causés par la diffusion par les impuretés. Un
utilitaire de facteur de dilution peut être utilisé pour calculer la concentration de la solution
mère.
On distingue deux types de méthode de test protéique : les tests UV direct et les tests
colorimétriques. Les tests colorimétriques incluent plusieurs tests qui sont similaires. De la
même façon, les méthodes directes sont également très similaires. Pour identifier la procédure
de test appropriée, reportez-vous au tableau ci-dessous.
Thermo Scientific
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