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Bio-tests
Mesure des protéines
Coomassie/Bradford Std (Méthode standard de Coomassie/Bradford) – Le test de
Coomassie/Bradford est une méthode colorimétrique bien connue qui permet de déterminer
la concentration des protéines. Le colorant passe d'un brun-rouge à un bleu en présence de
protéines ; par conséquent, la longueur d'onde optimale pour le test est de 595 Nm. Ce test
produit une courbe d'étalonnage de deuxième ordre. La version standard de ce test est
préprogrammée pour les standards dont la plage de concentration se situe entre 25 μg/ml et
2000 μg/ml.
Coomassie/Bradford Micro (Micro-méthode de Coomassie/Bradford)– La micro-version de
ce test est destinée à mesurer des concentrations de protéines inférieures au format de test
standard. Comme pour la méthode standard, la longueur d'onde d'analyse est de 595 Nm et
la courbe d'étalonnage est de deuxième ordre. La micro-version de ce test est préprogrammée
pour les standards dont la plage de concentration se situe entre 2,5 μg/ml et 25 μg/ml.
Lowry Standard (Méthode standard de Lowry) – Depuis de nombreuses années, le test de
Lowry est la méthode colorimétrique la plus citée pour déterminer la concentration des
protéines. Du fait d'une importante dépendance aux limites de pH, l'intérêt d'utilisation de ce
test, qui repose sur la réduction du réactif de Folin-Ciocalteu, est restreint. La longueur
d'onde optimale pour ce test est de 550 Nm. Ce test produit une courbe d'étalonnage de
deuxième ordre. La version standard de ce test est préprogrammée pour les standards dont la
plage de concentration se situe entre 100 μg/ml et 2000 μg/ml.
Pierce Modified Lowry (Méthode de Lowry modifiée par Pierce) – Pierce a développé une
formulation modifiée de la méthode de Lowry idéale pour les utilisateurs souhaitant tirer au
mieux avantage d'un produit préformulé stable. Cette méthode améliore considérablement la
stabilité et l'intérêt d'utilisation de la méthode de Lowry. Une corrélation de près de 100 % est
obtenue entre les courbes de réponse colorées établies avec la méthode de Lowry modifiée et la
méthode de Lowry d'origine. Cette méthode mesure l'absorbance à 750 Nm et utilise une
courbe d'étalonnage de deuxième ordre. La plage de concentration des standards
préprogrammés pour ce test se situe entre 1 μg/ml et 1500 μg/ml.
BCA Standard (Méthode standard BCA) – Ce test, breveté par Pierce Biotechnology qui fait
partie de Thermo Fisher Scientific, reste un test fondamental car il permet de mesurer avec
précision la concentration de protéines dans des échantillons biologiques. Il combine la
2+
1+
réduction bien connue de Cu
à Cu
par protéine dans un milieu alcalin à la détection
1+
colorimétrique ultrasensible et sélective du cation cuivreux (Cu
) par l'acide bicinchoninique
(BCA). Le complexe BCA de coloration pourpre peut être mesuré à n'importe quelle longueur
d'onde, entre 550 Nm et 570 Nm, avec une perte de signal minimale. Alors que ce test est
linéaire sur une large plage de concentration, les courbes d'étalonnage sont représentées au
mieux sous la forme de courbes de deuxième ordre. La méthode préprogrammée utilise une
longueur d'onde d'analyse de 562 Nm et intègre des standards préprogrammés dont la plage de
concentration se situe entre 25 μg/ml et 2000 μg/ml.
Pierce 660 nm – Le Pierce 660 nm Protein Assay utilise un complexe teinture-métal exclusif
qui se lie aux protéines dans des conditions d'acidité, provoquant un décalage du maximum
d'absorption de la teinture, qui est mesurée à 660 nm. Le complexe teinture-métal est brun
rouge et devient vert lorsque les protéines se lient. Ce changement de couleur est dû à la
déprotonation de la teinture à pH faible facilitée par les interactions avec des groupes d'acides
aminés chargés positivement dans la protéine. Par conséquent, le complexe interagit
essentiellement avec les résidus basiques de la protéine, comme l'histidine, l'arginine et la
lysine, et à moindre ampleur avec la tyrosine, le tryptophane et la phénylalanine.
Thermo Scientific
Manuel d'utilisation du BioMate 3S
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