Les Trois Principes De Base De La Fluorescence - Shimadzu RF-1501 Manuel D'instructions

Spectrofluorophotometre
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5.3
Principe 1
5
Pour qu'une substance émette de la fluorescence, l'absorption de lumière doit s'opérer en premier.
Principe 2
En règle générale, la fluorescence a une plus grande longueur d'onde que la lumière d'excitation.
Principe 3
Le rendement quantique de la fluorescence (Q) est déterminé par le nombre de transitions sans
rayonnement dans lesquelles l'énergie absorbée est dispersée en chaleur ou sous d'autres formes
d'énergie.
5
n
e : Fréquence d'émission lumineuse
n
f : Fréquence de transition sans rayonnement
5
Le principe 1 impose que la tâche de test d'un échantillon inconnu commence par la mesure de son
spectre d'absorption avec une concentration relativement plus élevée. En l'absence d'absorption, on
considère qu'il n'y a pas d'émission de fluorescence, et ce, même si l'échantillon est excité à la
5
longueur d'onde. A l'inverse, l'émission de fluorescence est la plus intense lorsque l'échantillon est
excité à la longueur d'onde de pic de l'absorption.
Le principe 2 indique que, dans la mesure où une partie de la lumière absorbée est perdue sous la
5
forme de vibration ou d'énergie calorifique, comme expliqué à la section 5.2, l'énergie de
rayonnement résiduelle est réduite, d'où un décalage de la longueur d'onde de la fluorescence vers le
côté supérieur. Dès lors, la tâche de mesure du spectre de fluorescence peut se réduire au simple
5
balayage du côté supérieur de la longueur d'onde de la lumière d'excitation.
Le principe 3 utilise le rendement quantique de fluorescence (Q) pour indiquer la part du photon
absorbé qui est rayonnée sous la forme de fluorescence. Plus la valeur de Q est élevée, plus la
5
substance produit facilement de la fluorescence.
Le
Tableau 5.1
5
5
5
5
5-4
SERIE RF-1501

Les trois principes de base de la fluorescence

5.3
répertorie les rendements quantiques des substances fluorescentes types.
Tableau 5.1 Composés et rendements quantiques de fluorescence
Composé
Fluorescéine
Eosine
Rhodamine B
Riboflavine
Anthracène
Naphthalène
Indole
Chlorophylle a
Chlorophylle b
n
e
=
Q
n
n
+
e
f
Solution
0,1 N-NaOH
0,1 N-NaOH
Alcool éthylique
Solution aqueuse, pH7
Alcool éthylique
Alcool éthylique
Eau
Ether
Ether
Rendement
quantique
0,92
0,19
0,97
0,26
0,30
0,12
0,45
0,32
0,12

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