SCM Zeiss LSM 710 Manuel D'utilisation page 55

Déroulement d'une session
Si l'on mesure l'intensité le long de la ligne tracée ci-dessous on obtient le profil d'intensité suivant :
Mesure de l'intensité le long de la
La distance D du 1
fonction de la longueur d'onde d'émission du fluorochrome et de l'ouverture numérique de l'objectif
utilisé.
La formule est : �� (���� ����) = 2 × (
Donc plus la longueur d'onde est grande plus la largeur du 1
Pour être confocal, le pinhole doit avoir une taille comprise entre 0,8 et 1 AU.
Mais attention, si nous calons la taille du pinhole à 1 AU par rapport au dapi nous serons en dessous de
l'unité d'Airy pour les autres canaux (Le mode de switch « Frame Fast »
ne permet pas de changer la taille du pinhole entre les tracks) :
Etape 7)
Il faut donc trouver un bon compromis pour que la taille du pinhole soit dans l'intervalle 0,8 – 1 AU pour
toutes les tracks (voir étape 4 ci-après). Un pinhole trop grand ne vous donnerait plus une image confocale.
Un phinhole trop petit ne permettrait plus de recueillir suffisamment de signal.
*
 | Version 3.1
Manuel d'Utilisation –
ligne
Profil d'intensité
er
pic d'intensité correspond à 1 Airy Unit (1 AU). La largeur de ce premier pic varie en
0,61 × ���������������� ��
������������������ ��������������� ���� ��'����������������
DAPI
Alexa 488
TRITC
Service Commun de Microscopie
Microscope Confocal Zeiss LSM 710 –
D = 1 Airy Unit
'
�������� (���� ����)
)
er
pic est grande.
D = 1 Airy Unit
D = 0,8 Airy Unit
D = 0,4 Airy Unit
(voir Le panneau « Imaging Setup » - p.32 -
Précis
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