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Déroulement d'une session
Réalisation de la configuration confocale
Afin comprendre plus facilement la procédure de configuration du trajet optique en mode confocal, nous utiliserons
un exemple concret.
Description de l'exemple
Pour réaliser la configuration confocal nous nous appuierons sur l'échantillon suivant intitulé « Lame de démo » :
Cellules endothéliales bovines marquées de la façon suivante :
DAPI pour le marquage du noyau.
Alexa 488 pour le marquage des filaments d'actine.
TRITC pour le marquage des mitochondries.
Ce type de triple marquage est très régulièrement utilisé en microscopie photonique.
Le but de ce chapitre est de paramétrer le trajet optique en mode confocal afin de pouvoir visualiser les 3 éléments
marqués de notre échantillon (Noyaux, filaments d'actine et mitochondries
Les informations concernant l'exemple seront bordées de cette ligne
Connaître ses fluorochromes
Avant de vous lancer dans la configuration du trajet optique confocal, il est primordial que vous connaissiez les spectres
d'excitation et d'émission des fluorochromes présents dans votre échantillon. Ici nous avons dans la lame de démo :
du DAPI, de l'Alexa 488 du TRITC.
Pour connaitre l'allure des spectres d'excitation et d'émission :
1. Rendez-vous sur le site internet de « Thermo Fisher » dans la rubrique « Services & Support » puis dans la
catégorie « Fluorescence SpectraViewer ».
a. Cliquez sur l'icône
b. Cliquez sur le raccourci
(Adresse : https://www.thermofisher.com/fr/fr/home/life-science/cell-analysis/labeling-chemistry/fluorescence-spectraviewer.html)
Légende :
A-
B-
Copie d'écran 9 : Fenêtre SpectraViewer
26
« Mozilla Firefox » dans la barre de tâche Windows.
Choix des fluorochromes
Ajout de fluorochrome
Service Commun de Microscopie
Manuel d'Utilisation –
Microscope Confocal Zeiss LSM 710 –
.
dans la barre de tâche Firefox (en haut de la fenêtre).
).
voir ci-dessus
Précis
Version 3.1 |
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