Déroulement d'une session
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M
- Indique le cube de fluorescence en place. Il faut donc s'assurer ici que cette icône soit sur « None LSM »
pour laisser passer librement le laser.
*
O
- Permet de détecter le signal en transmission si l'icône est activée.
*
G
- Permet de visualiser et d'ajuster la bande passante de détection du signal.
La bande passante doit :
3. Laisser passer, dans la mesure du possible, le pic d'émission du fluorochrome.
4. Bloquer la longueur d'onde d'excitation.
5. Bloquer l'émission provenant éventuellement d'autres fluorochromes présents dans
l'échantillon.
Pour ajuster la largeur de la bande, cliquez et maintenez sur une extrémité de la bande puis fais glisser
avec la souris.
Si nous analysons maintenant la configuration créée par le « Smart Setup » pour notre exemple nous remarquerons
que le logiciel a mis en place des miroirs dichroïques différents (Zone K
ci-dessous).
458 488 514 561 633 458 488 514 561 633 458 488 514 561 633
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**
**
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ce miroir permet bien de
Conclusion
réfléchir la raie 405 nm
sélectionnée en J
La configuration créée par le « Smart Setup » fonctionne bien. Cependant à chaque changement de track les miroirs
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dichroïques K
et L
changent. Ces changements font perdre un temps considérable lors de l'acquisition. L'idéal serait
donc de trouver un miroir pour la zone K
éviterait des changements de miroirs au moment des changements de tracks. Pour cela suivez la suite de la procédure.
6. Sélectionnez le mode switch « Frame Fast » (Icône B
A quoi sert le « Frame Fast » :
En utilisant le mode « Frame Fast » vous optimisez au maximum la vitesse d'acquisition pour les configurations multi-
tracks.
En effet, le « Frame Fast » empêchera le changement de miroir dichroïque lors du changement de track, empêchera
le chevauchement des bandes passantes de détection et empêchera les changements de tailles de pinholes entre les
tracks.
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Voir Copie d'écran 16 : Panneau "Imaging Setup" – p.32 ou Copie d'écran 17 : Configuration des tracks pour l'exemple – p.33
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Voir Copie d'écran 17 : Configuration des tracks pour l'exemple – p.33
34
Track 1
405
Plate = Rien
MBS 405
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et un miroir pour la zone L
Service Commun de Microscopie
Manuel d'Utilisation –
Microscope Confocal Zeiss LSM 710 –
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et L
Track 2
405
MBS 488/561/633
Plate = Rien
ce miroir permet bien de
réfléchir la raie 488 nm
sélectionnée en I
**
qui fonctionnent pour toutes les tracks. Ceci
*
).
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) pour chacune des tracks (voir tableau
Track 3
405
MBS 458/561
Plate = Rien
ce miroir permet bien de
réfléchir la raie 561 nm
sélectionnée en I
Précis
Version 3.1 |