Table des Matières
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IV. Extractions et purifications
1. Extraction avec le kit ADIAPURE™ SLB
Se référer à la version de notice disponible sur le site web indiqué sur le certificat d'analyse
inclus dans le kit utilisé.
2. Extraction avec le kit ADIAMAG
Se référer à la version de notice disponible sur le site web indiqué sur le certificat d'analyse
inclus dans le kit utilisé.
3. Extraction avec le kit QIAamp® DNA Mini kit
a) Préparation des échantillons
Remarque : il est préférable de traiter individuellement les écouvillons d'autopsie très souillés.
Possibilité N°1
Placer 1 écouvillon ou vortexer successivement jusqu'à 3 écouvillons dans un microtube contenant 180 µl de
tampon ATL et 20 µl de protéinase K.
NB : si les écouvillons ont été peu ou pas humidifiés, ils vont absorber l'ensemble du réactif. Dans ce
cas, doubler la quantité de tampon de lyse.
Vortexer.
Essorer l'écouvillon contre le bord du tube pour recueillir le maximum de tampon.
Cf. § IV 3b pour l'extraction et la purification des ADN.
Possibilité N°2
Couper 1 à 3 écouvillons au ras du coton dans un tube (par exemple, tube à hémolyse de 5 ml) contenant
700 µl d'eau physiologique.
Vortexer ~10 secondes.
Transférer 200 µl de surnageant dans un microtube contenant180 µl de tampon ATL et 20 µl de protéinase
K. Vortexer.
Cf. § IV 3b pour l'extraction et la purification des ADN.
NB : les écouvillons en eau physiologique peuvent être stockés à +2/8°C.
Prendre un écouvillon légèrement humidifié avec de l'eau peptonée à 2% et écouvillonner la boite.
Placer ensuite cet écouvillon dans un microtube contenant180 µl de tampon ATL et 20 µl de protéinase K.
Vortexer.
Essorer l'écouvillon contre le bord du tube pour recueillir le maximum de tampon.
Cf. § IV 3b pour l'extraction et la purification des ADN.
Centrifuger (20 minutes à 10 000 g) entre 100 à 500 µl de culture dans un microtube.
Jeter le surnageant.
Ajouter au culot 180 µl de tampon ATL et 20 µl de protéinase K. Vortexer.
Cf. § IV 3b pour l'extraction et la purification des ADN.
Ajouter 30 ml d'eau peptonée dans le sachet contenant la chiffonnette sèche.
Homogénéiser en malaxant le sachet.
1) À partir d'écouvillons
2) À partir de culture solide
3) À partir de culture liquide
4) À partir de chiffonnettes
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