a) Validation de l'essai :
L'amplification est valide si les résultats suivants ont été obtenus pour les témoins :
Témoins
Amplification FAM
Amplification Cy5
Si extraction
ADIAPURE SLB
(EPC-Amp non
Amplification
ajouté au mix)
VIC/HEX
Si autres
extractions (EPC-
Amp ajouté au
mix)
Validation de
* optionnel
Les valeurs indicatives de Ct attendues en FAM, Cy5 et VIC/HEX pour les témoins positifs
(« CTL+ ») sont indiquées sur le certificat d'analyse du kit.
b) Interprétation des résultats
L'extraction de l'ADN et l'amplification sont valides pour chacun des échantillons si au moins
une courbe d'amplification caractéristique est observée en
M. iowae
Exemple
Amplification FAM
Amplification Cy5
Amplification VIC/HEX
Résultat
L'échantillon est considéré comme Non Détecté si une courbe d'amplification caractéristique
est observée en VIC ou HEX sans qu'il y ait de courbe d'amplification caractéristique en FAM
et en Cy5 (exemple A).
L'échantillon est considéré comme Détecté si une courbe d'amplification caractéristique est
observée en FAM (exemples B et D) et/ou en Cy5 (exemples C et D). Le Contrôle Interne peut
être co-amplifié.
L'absence totale de courbe d'amplification caractéristique pour un échantillon (exemple E)
indique une déficience de l'extraction de l'ADN (perte ou destruction de l'ADN) ou une PCR
temps-réel défectueuse (présence d'inhibiteurs dans l'échantillon, erreur de programme ou
absence d'échantillon). Dans ce cas, il est conseillé de refaire le test en utilisant l'extrait
d'ADN pur et dilué au 1/10
n'est toujours pas validé, une nouvelle extraction de l'ADN total de l'échantillon est
souhaitable.
Témoin réactif
(NTC)
non
non
non
oui
Absence de
contamination
pour
l'amplification
(Cy5) ou en contrôle interne (VIC/HEX).
A
B
Non
Oui
Non
Non
Oui
Oui/Non
Positif en
Négatif
M. meleagridis
ème
Témoin positif
Témoin positif
d'amplification
d'amplification
(MM CTL+)
(MI CTL+)
oui
non
non
oui
Amplification
Amplification
de la cible
de la cible
M. meleagridis
M. iowae
C
Non
Oui
Oui/Non
Positif en
M. iowae
dans de l'eau Nuclease-free. Dans un second temps, si le test
Témoin
négatif
d'extraction
non
non
oui
non
non
oui
oui
oui
Absence de
contamination
pour
l'extraction
M. meleagridis
D
Oui
Oui
Oui/Non
Positif en
M. meleagridis
et
M. iowae
Témoin positif
d'extraction*
oui
oui
oui
oui
Etapes
d'extraction et
d'amplification
(FAM), en
E
Non
Non
Non
Non déterminé
A refaire
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