invitrogen 00-8401 Mode D'emploi page 3

No de catalogue 00-8401
Kit de prétraitement de tissu SPOT-Light
Pour le prétraitement enzymatique et thermique de tissus FFIP avant la CISH
À utiliser pour le prétraitement thermique et la digestion enzymatique de tissus fixés dans du formol et incorporés dans de la paraffine (FFIP) avant
la détection de l'hybridation chromogène in situ (
RÉACTIFS FOURNIS
1. Un litre de solution de prétraitement thermique, pH 7,0 (prêt à l'emploi)
2. Un flacon de 10 mL de réactif enzymatique (prêt à l'emploi)
STOCKAGE
Conserver entre 2 et 8 °C.
STABILITÉ
Ne pas utiliser après la date de péremption estampillée sur le carton. Il n'y aura pas de perte de performance importante si les conditions de
stockage sont adéquates. Toute condition de stockage autre que celle spécifiée doit être validée par l'utilisateur.
USAGE
PREPARATION DU TISSU
Les lames doivent être traitées avec un adhésif avant d'y attacher la section du tissu. Déparaffiner les lames et déshydrater les sections de tissu.
Effectuer le prétraitement thermique et la digestion enzymatique tel que recommandé dans le mode d'emploi fourni avec la sonde ISH. La
procédure suivante peut être utilisée si le mode d'emploi pour la sonde n'est pas disponible.
PRETRAITEMENT THERMIQUE
1. Chauffer 500 mL la solution de prétraitement du tissu SPOT -Light
jusqu'à 98 à 100 °C. Faire bouillir les lames pendant 15 minutes (remarque : différents temps d'incubation seront nécessaires en fonction de la
fixation du tissu. Une incubation de 15 minutes est recommandée comme point de départ).
2. Laver dans un soluté tampon de phosphate ou du dH
DIGESTION ENZYMATIQUE
1. Couvrir le tissu avec 100 à 200 µL de réactif enzymatique (Réactif 2) pendant 10 minutes à température ambiante.
Remarque: différents temps d'incubation seront peut-être nécessaires en fonction du produit fixateur de tissu utilisé. Une digestion excessive
entraînera une perte de noyaux et de structure chromosomique. Veuillez vous reporter à la section Dépannage pour plus de détails.
2. Laver dans un soluté tampon de phosphate ou du dH
Déshydrater les lames dans de l'éthanol à 70 %, 85 %, 95 %, et 100 % pendant 2 minutes chacune à température ambiante, sécher à l'air et passer à
la dénaturation et l'hybridation.
DEPANNAGE
1. Tout au long de cette procédure, sauf indication contraire, il est important que la section de tissu ne se dessèche pas.
2. Prétraitement à la chaleur (L'étape la plus importante pour une performance CISH réussie) :
Le spécimen doit être bouilli ou chauffé à plus de 98 °C pendant 15 min dans une solution de prétraitement à la chaleur.
3. Digestion enzymatique (Une étape importante pour une performance CISH réussie) : des temps d'incubation différents (5 à 15 min) seront peut-
être nécessaires en fonction du type de tissu et de la méthode de fixation. Pour la plupart des tissus du sein, une digestion enzymatique de 10 min
à température ambiante (TA) donnera les meilleurs résultats du CISH. Ne pas oublier de préchauffer le réactif de prétraitement
enzymatique à TA avant d'ajouter la section de tissu. Le prétraitement enzymatique du spécimen doit être évalué dès que le protocole du CISH est
terminé. Si les noyaux ne manifestent pas de coloration de contraste et qu'il n'y a pas de signal CISH ou que ce dernier est très faible, c'est peut-être
dû à une perte nucléaire suite à une digestion excessive. Si les noyaux manifestent une forte coloration de contraste mais qu'il n'y a pas de signal
CISH dans les noyaux, c'est peut-être dû à une sous digestion lors du prétraitement à la pepsine. Une alternative serait d'effectuer le prétraitement
enzymatique à 37 °C pendant 3 minutes si des résultats optimaux n'ont pas été obtenus.
4. Une dénaturation de la sonde à une température inférieure à celle que recommande le protocole risque d'avoir pour résultat un signal CISH faible ou
absent.
5. Une hybridation effectuée pendant des périodes plus courtes que celles recommandées par le protocole ou des lavages rigoureux effectués à des
températures supérieures à celles recommandées risquent d'entraîner une réduction ou une perte totale du signal CISH.
6. Veuillez contacter votre distributeur local ou Invitrogen à tech_support@invitrogen.com.
MARQUE DE COMMERCE
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Zymed et SPOT -Light sont des marques de commerce de Invitrogen.
Représentant Autorisé pour IVDD 98/79/EC:
PI008401
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CISH
).
0 à température ambiante (TA) pendant 2 x 3 minutes.
2
0 à température ambiante pendant 3 x 2 minutes.
2
Invitrogen Ltd.
Inchinnan Business Park
3 Fountain Drive
Paisley
PA4 9RF
UK
Invitrogen Corporation • 542 Flynn Rd • Camarillo • CA 93012 • Tel: 800.955.6288 • E-mail:
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(Réactif 1) dans un bécher sur une plaque chauffante jusqu'à ébullition ou
www.invitrogen.com
techsupport@invitrogen.com
(Rev 12/09) DCC-09-1898