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Catálogo Nº 00-8401
®
SPOT-Light
Equipo para pretratamiento tisular
Para el pretratamiento térmico y enzimático del tejido FFPE antes del CISH.
Para utilizar en el pretratamiento térmico y digestión enzimática de tejidos infiltrados en parafina y fijados con formol (FFPE) antes de la detección de
la hibridización cromogénica in situ (
REACTIVOS PROPORCIONADOS
1. Un litro de solución para pretratamiento térmico, a pH 7,0 (lista para usar)
2. Un frasco de 10 mL de reactivo enzimático (lista para usar)
ALMACENAMIENTO
Guardar a 2-8°C.
ESTABILIDAD
No utilizar una vez pasada la fecha de caducidad estampada en el contenedor. Si se guarda como corresponde no hay pérdida significativa del
rendimiento. Cualquier condición de almacenamiento que no se encuentre entre las especificadas, debe ser validada por el usuario.
PREPARACIÓN DEL TEJIDO
Antes del montaje del corte tisular, los portas se deben tratar con un adhesivo. Desparafinizar los portas y deshidratar los cortes de tejido.
Realizar el pretratamiento térmico y la digestión enzimática, según lo recomendado en las instrucciones que se proporcionan con la sonda ISH. Si no se
dispone de las instrucciones de sonda, se puede utilizar el siguiente procedimiento.
PRETRATAMIENTO TÉRMICO
1. Calentar 500 mL la Solución para pretratamiento tisular SPOT -Light
hierva o su temperatura llegue a los 98-100°C. Hervir los portas durante 15 minutos (Nota: pueden ser necesarios tiempos de incubación distintos, en
función de la fijación del tejido. El punto de tinción recomendado es una incubación de 15 minutos).
2. Lavar en PBS o dH
0 a temperatura ambiente (TA) durante 2 x 3 minutos.
2
DIGESTIÓN ENZIMÁTICA
1. Cubrir el tejido con entre 100 y 200 µL de reactivo enzimático (reactivo 2) durante 10 minutos a temperatura ambiente.
Nota: dependiendo del fijador de tejido utilizado, pueden ser necesarios tiempos de incubación distintos. La digestión excesiva provocará la pérdida de
estructura de los núcleos y cromosomas. Para más información, consulte la sección Detección y diagnóstico de averías.
2. Lavar en PBS o dH
0 a temperatura ambiente (TA) durante 3 x 2 minutos.
2
Deshidratar los portas en una serie de etanol al 70%, 85%, 95% y 100% durante 2 minutos cada uno, a temperatura ambiente. Secar al aire y proseguir
con la desnaturalización e hibridización.
DETECCIÓN Y DIAGNÓSTICO DE FALLOS
1. Excepto indicación en contrario, es importante que no se seque el corte tisular a lo largo del procesamiento.
2. Pre-tratamiento por calor (El paso más importante para el funcionamiento satisfactorio de CISH):
Los portas/especímenes deben hervirse o calentarse por encima de 98 °C durante 15 min. en solución de pre-tratamiento por calor.
3. Digestión enzimática (Un paso esencial para el correcto funcionamiento de CISH): Pueden ser necesarios distintos tiempos de incubación
enzimática (5-15 min.) dependiendo del tipo de tejido y del método de fijación. Para la mayoría de tejidos de mama, 10 min. de digestión
enzimática a temperatura ambiente (RT) producirán los mejores resultados de CISH. Asegúrese de precalentar el Reactivo de Pre-
tratamiento enzimático a temperatura ambiente antes de agregarla al corte tisular. El pre-tratamiento enzimático del espécimen debería
evaluarse inmediatamente tras la finalización del protocolo CISH. Si los núcleos no están contra teñidos y no aparece señal CISH o ésta es muy
débil, ello puede deberse a la pérdida nuclear como resultado de la digestión excesiva. Si los núcleos están fuertemente contra teñidos pero no
aparece señal CISH en los núcleos, ello puede deberse a la infra-digestión durante el pre-tratamiento de pepsina. Como alternativa, el pre-tratamiento
enzimático también puede realizarse a 37 °C durante 3 minutos si no se obtienen resultados óptimos.
4. La desnaturalización de la sonda a una temperatura inferior a la recomendada por el protocolo puede dar como resultado una señal CISH débil o
ausente.
5. La hibridización realizada durante períodos de tiempo más cortos, o los lavados realizados a temperaturas más elevadas que las recomendadas para
el protocolo pueden producir una disminución o la pérdida total de la señal CISH.
6. Por favor, póngase en contacto con su distribuidor local o con Invitrogen en tech_support@invitrogen.com.
MARCA REGISTRADA
®
®
Zymed
y SP T -Light
son marcas registradas de Invitrogen.
Representante autorizado de IVDD 98/79/EC:
PI008401
© 2007 Invitrogen Corporation. All right reserved. These products may be covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Invitrogen Catalog or www.invitrogen.com).
By use of these products you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses.
CISH
).
Invitrogen Ltd.
Inchinnan Business Park
3 Fountain Drive
Paisley
PA4 9RF
UK
Invitrogen Corporation • 542 Flynn Rd • Camarillo • CA 93012 • Tel: 800.955.6288 • E-mail:
®
(reactivo 1) en un vaso para precipitados sobre una placa térmica hasta que
www.invitrogen.com
techsupport@invitrogen.com
(Rev 12/09) DCC-09-1898
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