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C
3 O
HAPITRE
PÉRATIONS DE DOSAGE
Chapitre 3. Opérations de dosage
3.1 Principe du dosage
Sur la base du principe de la chromatographie liquide à haute performance ou HPLC
(High Performance Liquid Chromatography), l'analyseur utilise une colonne
d'échange de cations pour séparer les composants de l'hémoglobine en fonction des
différences d'interactions ioniques. Les différents composants de l'hémoglobine,
dont les hémoglobines F et A
Un gradient progressif combiné à un gradient linéaire avec trois concentrations
ioniques différentes (G8 ß-Thalassemia Elution Buffer No. 1, No. 2 et No. 3) sont
utilisés pour la séparation.
La figure 3-1 montre le cheminement des éluants dans l'unité principale. Chaque
tampon d'élution dégazé automatiquement, est pompé au travers d'électrovannes
commandées vers la colonne via une valve injection et le filtre. En utilisant la solution
hémolysante, l'unité d'échantillonnage aspire puis dilue environ 8 µl de sang total
dans le puits de dilution.
L'échantillon est injecté, puis envoyé vers à la colonne.
Les composants de l'hémoglobine, séparés dans la colonne, sont dirigés dans le
détecteur de façon continue. La détection se fait par spectrométrie. Lorsque l'analyse
est terminée, le chromatogramme et les pourcentages des différentes fractions de
l'hémoglobine sont automatiquement imprimés.
Fig. 3-1 Schéma de la fluidique du système
, sont rapidement séparés (6 minutes par échantillon).
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