Table des Matières
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Préparation
3.6 Préparation du Milieu de Culture
sur le terrain à l'aide du Dispositif
de Mesure de Milieu (DMM)
Éléments requis:
• 38,1g Bouillon de laurylsulphate
pour membrane (MLSB)
• Dispositif de mesure de milieu (DMM)
• 100 ml d'eau distillée ou propre
• pH-mètre
• Autocuiseur/Stérilisateur/Autoclave
• Source de chaleur
1 Si vous ne disposez pas d'eau distillée,
choisissez l'eau la plus propre disponible, ex.
eau de pluie, eau filtrée ou, le cas échéant,
laissez de l'eau brute dans un récipient pendant
une nuit. N'utilisez pas d'eau qui a été chlorée.
Faites bouillir l'eau pendant au moins dix
minutes, couvrez et laissez-la refroidir.
2 Si vous utilisez de l'eau brute, il peut être
nécessaire de filtrer 100ml de cette eau
par le biais du filtre à membrane à l'aide de
l'unité de filtration à membrane ou UFM, voir
section 7 Utilisation de l'UFM. Si l'eau est
trouble, il peut être nécessaire de répéter
cette étape. Préparez autant d'eau filtrée
que vous en avez besoin.
3 Utilisez le pH-mètre pour vérifier le pH de
l'eau à utiliser pour fabriquer le milieu liquide.
Pour fabriquer le BLSM, l'eau doit avoir un pH
de 7,2 à 7,6. Le pH doit être corrigé ou une
autre source d'eau devra être trouvée si la
valeur est en dehors de la plage idéale. Ajustez
le pH à l'aide d'une solution d'hydroxyde
de sodium diluée (qui augmente le pH) ou
d'acide chlorhydrique dilué (qui baisse le pH).
4 Faites bouillir l'eau distillée/propre pendant
10 minutes avant de la laisser refroidir.
5 Veillez à ce que les DMM soient stériles
avant de commencer. Les DMM peuvent être
stérilisés debout à l'aide d'un autoclave.
Vissez le couvercle pour qu'il tienne bien en
place, mais sans être complètement étanche
à l'air pour empêcher le développement
d'une haute pression. Veillez à ne pas placer
les DMM directement au fond de l'autoclave.
Stérilisez à 121°C pendant 10 minutes.
Autrement, placez les DMM dans un
autocuiseur et maintenez la vapeur en
pression pendant 15 minutes.
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6 Sortez les DMM et laissez-les refroidir.
7 Après refroidissement, dévissez le couvercle/
cuiller bleu du DMM. Prélevez dix cuillerées
rases de milieu dans le récipient de 38,1g
du BLSM et ajoutez aux DMM. Tenez-les
toujours par le couvercle et ne touchez pas
la cuiller elle-même.
8 Remplissez les DMM d'eau stérilisée jusqu'au
bord inférieur et vissez à fond le couvercle.
9 Secouez les DMM
pour aider à
dissoudre le BLSM
en poudre. Une
fois dissolu, le
liquide rouge/rose
vif apparaîtra.
10 Dans l'idéal, pour minimiser le risque de
contamination les DDM contenant le BLSM
liquide doivent maintenant être stérilisés.
Dévissez légèrement le couvercle pour qu'il
reste en place mais soit légèrement desserré
et stérilisez de nouveau comme à l'étape 5.
11 Une fois cette étape achevée, sortez les
DMM et laissez-les refroidir. Revissez les
couvercles à fond et stockez dans un endroit
frais et sombre jusqu'à leur utilisation.
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