Protocole Pour L'extraction De L'adn De Mycobacteries A Partir De Feces; Préparation Du Prélèvement; Broyage Avec Le Mixer Mill - Adiagene Adiapure Manuel D'instruction

IV. Protocole pour l'extraction de l'ADN de mycobactéries à partir de fèces
1. Préparation du prélèvement
Pour les fèces bovins : Placer 1 g +/- 0,2 g de fèces dans un flacon avec 20 ml d'eau distillée
stérile ou d'eau PPI et vortexer pendant environ 15 secondes. Laisser sédimenter 5 minutes,
jusque 20 minutes si nécessaire.
Pour les fèces ovins et caprins, écraser 1 g +/- 0,2 g au fond du flacon. S'il y a plus d'1 g de
fèces, respecter le rapport matière fécale/eau (exemple : 2 g dans 40 ml d'eau). Une
réhydratation toute la nuit à température ambiante est conseillée. Vortexer pendant environ
15 secondes. Laisser sédimenter 5 minutes, jusque 20 minutes si nécessaire.
(Rq : Parfois certains fèces ne sédimentent pas au bout de 20 minutes alors il faut ajouter
l'étape d pour éviter le colmatage)

• Broyage avec le Mixer Mill

a- Transférer 300 µl du surnageant dans un tube Glass Beads et ajouter 300 µl du Lysis Buffer
L1.
b- Broyer 10 minutes à 30Hz. Si le support de tubes n'est pas complet, remplir de tubes vides
afin d'augmenter l'étanchéité.
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