Déroulement d'une session
Connaître ses fluorochromes
Afin d'utiliser efficacement le microscope en mode épifluorescence, il est indispensable de bien connaître les
fluorochromes utilisés pour marquer votre échantillon.
Les informations indispensables à connaître sont les spectres d'excitation et d'émission des fluorochromes présents
dans votre échantillon. Ici nous avons dans la lame de démo : du DAPI, de l'Alexa 488 du TRITC.
Pour connaître l'allure des spectres d'excitation et d'émission :
1. Rendez-vous sur le site internet de « Thermo Fisher » dans la rubrique « Services & Support » puis dans la
catégorie « Fluorescence SpectraViewer ».
Sur les ordinateurs du SCM :
a. Cliquez sur l'icône
b. Cliquez sur le raccourci
(Adresse : https://www.thermofisher.com/fr/fr/home/life-science/cell-analysis/labeling-chemistry/fluorescence-spectraviewer.html)
Légende :
A-
B-
Copie(s) d'écran 5 : Fenêtre SpectraViewer
2. Sélectionnez vos fluorochromes grâce au menu déroulant « Fluorophore »
Utilisez « + Add » pour ajouter des fluorochromes
Ici nous avons donc sélectionné : DAPI, Alexa 488 et TRITC.
3. Visualisez les spectres d'excitation et d'émission des fluorochromes de l'échantillon.
Passez le curseur de la souris sur les spectres (voir exemple au Point A dans la copie d'écran suivante) pour
visualiser les valeurs de longueurs d'ondes aux différents pics (les valeurs sont indiquées dans la zone B sur la
copie d'écran suivante).
1
Voir Copie(s) d'écran 5 : Fenêtre SpectraViewer – p.32 – Point A
2
Voir Copie(s) d'écran 5 : Fenêtre SpectraViewer – p.32 – Point B
32
« Mozilla Firefox » dans la barre de tâche Windows.
Choix des fluorochromes
Ajout de fluorochrome
Service Commun de Microscopie
Manuel d'Utilisation –
Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E
dans la barre de tâche Firefox (en haut de la fenêtre).
A
B
2
1
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Version 2.2 |