Nikon Eclipse TE-2000E Manuel D'utilisation
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Microscope epifluorescence 1
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MANUEL D'UTILISATION - Précis
Microscope Epifluorescence 1
Nikon Eclipse TE-2000E
Version 2.2 – Précis
Novembre 2016

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Manuels Connexes pour Nikon Eclipse TE-2000E

Sommaire des Matières pour Nikon Eclipse TE-2000E

  • Page 1 Service Commun de Microscopie MANUEL D’UTILISATION - Précis Microscope Epifluorescence 1 Nikon Eclipse TE-2000E Version 2.2 – Précis Novembre 2016...
  • Page 3 SERVICE COMMUN DE MICROSCOPIE MANUEL D’UTILISATION Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Version 2.2 – Précis Novembre 2016...

  • Page 5: Table Des Matières

    Sommaire PRESENTATION DU MICROSCOPE ............................... 1 : ..............................2 ARACTERISTIQUES DU MICROSCOPE Sources de lumière ..................................2 Objectifs ..................................... 2 Caméras ..................................... 2 Platine X/Y ....................................2 Cubes de fluorescence ................................3 Roues de filtres ................................... 4 Roue de filtres d’excitation : ..................................4 Roue de filtres d’émission : ..................................
  • Page 6 ’ ................................. 31 TILISATION D UN EXEMPLE Description de l’exemple ................................31 ................................ 32 ONNAITRE SES FLUOROCHROMES ’ ................35 EALISATION DE LA MISE AU POINT ET VISUALISATION PAR L INTERMEDIAIRE DES OCULAIRES Etapes initiales ..................................35 Mise au point avec un objectif sec ................................35 Mise au point avec un objectif à...
  • Page 7 ......................................97 IGURES ......................................97 HOTOS...

  • Page 9: Presentation Du Microscope

    Ordinateur de pilotage Intensilight (Lampe metal halide pour la fluorescence) Table anti-vibratoire Le Microscope Epifluorescence 1 du Service Commun de Microscopie est monté sur un statif inversé Nikon Eclipse TE- 2000E (voir Photo(s) 1 ci-dessus – Point M).  | Version 2.2...

  • Page 10: Caracteristiques Du Microscope

    Présentation du microscope Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Caractéristiques du microscope : Sources de lumière  1 source halogène pour l’observation de l’échantillon en transmission  1 source Metal Halide « Intensilight » pour l’excitation et l’observation des fluorochromes (voir Photo(s) 1 p.1 –...

  • Page 11: Cubes De Fluorescence

    Présentation du microscope Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Cubes de fluorescence  Cube DAPI (Position 1 sur la tourelle) – Configuration [ Cube DAPI ]  Filtre d’Excitation : BP 377/50 nm  Miroir dichroïque : 409 nm ...

  • Page 12: Roues De Filtres

    Présentation du microscope Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Roues de filtres  Attention : N’utilisez jamais les configurations utilisant les roues de filtres - configuration notées (!! Wheel ----- !!) - pour regarder dans les oculaires. A utiliser uniquement avec la caméra monochrome.

  • Page 13: Configurations De Base Avec Les Roues De Filtres

    Présentation du microscope Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Configurations de base avec les roues de filtres: Les configurations utilisant les roues de filtres sont notées (!! Wheel ----- !!). N’utilisez jamais ces configurations pour regarder dans les oculaires.

  • Page 14: Trajet Optique Du Microscope

    Présentation du microscope Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Trajet optique du microscope Légende : Ex = Filtre d’excitation / BS = Beam Splitter = Miroir Dichroïque / Em = Filtre d’émission BP = Bande Passante > Le filtre laisse passer la lumière entre deux valeurs de longueurs d’ondes Les valeurs numériques sont données en nm (nanomètres).

  • Page 15: Configurations Disponibles

    Présentation du microscope Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Configurations disponibles Voir Figure 1 : Trajet optique du microscope - p.6  | Version 2.2 Service Commun de Microscopie...

  • Page 16: Consignes D'utilisations

    Consignes d’utilisations Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Consignes d’utilisations Lors de l’utilisation du microscope, vous vous engagez à suivre ces consignes : Formation Vous devez obligatoirement avoir été formé par le personnel de la Plate-Forme, pour pouvoir utiliser cet équipement.

  • Page 17: Consignes De Securite

    Consignes de sécurité Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Consignes de sécurité ATTENTION IMPORTANT RESCPECTEZ CES CONSIGNES DE SECURITE LE NON RESPECT DE CES CONSIGNES PEUT CAUSER DES BLESSURES ET DES DOMMAGES IRREVERSIBLES AU NIVEAU DES YEUX Le non-respect des consignes de sécurité...

  • Page 18: Presentation Du Software

    Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Présentation du software Le logiciel NIS-Element AR de Nikon pilote ce microscope. L’ensemble des opérations de contrôles du microscope pourra se faire directement dans le logiciel. Barre de menu Barre d’Icônes d’actions...

  • Page 19: Gestion De Lespace De Travail

    Présentation du software Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Gestion de l’espace de travail : Pour réaliser votre session avec un espace de travail reprenant l’ensemble de fonctions essentielles, il est conseillé de charger l’espace préenregistré nommé « SCM Simple ».

  • Page 20: Demarrage Du Microscope

    Démarrage du microscope Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Démarrage du microscope vue gauche vue droite 10 11 Direction Direction vue droite vue gauche Photo(s) 3 : Etapes de démarrage du microscope Les numéros indiqués sur la photo ci-dessus correspondent aux numéros indiqués sur les stickers collés sur le microscope et aux numéros de la liste qui suit (1 à...
  • Page 21 Démarrage du microscope Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Allumez l’ordinateur. Allumez l’écran s’il n’était pas en veille. Attendez que l’écran affiche le message suivant : « Appuyez sur CTRL + ALT + SUPPR pour ouvrir une session ».

  • Page 22: La Gestion Des Donnees

    La gestion des données Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E La gestion des données Une gestion des données efficace est primordiale pour permettre aux utilisateurs de pouvoir utiliser les équipements dans de bonnes conditions. En effet, une mauvaise gestion des données entraînerait une saturation des disques durs et diminuerait considérablement les performances de l’ordinateur de pilotage.
  • Page 23 La gestion des données Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E  A NE PAS FAIRE : NE BRANCHEZ JAMAIS DE PERIPHERIQUE SUR LES ORDINATEURS DU SCM (Pas de clé USB, Disques durs externes…). Pour ne pas ralentir ou bloquer le serveur : N’OUVREZ JAMAIS VOS IMAGES A PARTIR DU SERVEUR.

  • Page 24: Deroulement D'une Session

    Photometrics Coolsnap HQ2. Pour l’acquisition en couleur d’échantillons marqués pour l’histologie, référez-vous au manuel « Utilisation de la caméra couleur sur le Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE2000E ». Démarrage du logiciel 1. Lancez le logiciel de pilotage en double cliquant sur l’icône « NIS »...

  • Page 25: Initiation Pilotage/Manipulation Du Microscope

    Par exemple le 10x sec : Voir Photo(s) 1 : Vue d’ensemble du Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E – p.1 – Point D Voir Photo(s) 1 : Vue d’ensemble du Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E – p.1 – Point O Voir Copie(s) d'écran 1 : Le logiciel NIS-Element –...

  • Page 26: Onglet Coolsnap Hq2 Settings

    Photo(s) 4 : Télécommande de pilotage du microscope Voir Photo(s) 1 : Vue d’ensemble du Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E – p.1 – Point D Voir Photo(s) 1 : Vue d’ensemble du Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E – p.1 – Point O Version 2.2 | ...

  • Page 27: Télécommande Inntensilight

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E A partir de la télécommande de pilotage du microscope , vous pouvez :  Accéder aux informations générales grâce à l’écran d’affichage : Point  Choisir votre objectif en appuyant simplement sur la touche correspondante dans la zone...

  • Page 28: Ce Que Vous Pouvez Faire Sur Le Microscope

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E  Ajuster l’intensité d’excitation de la lampe fluo Intensilight en utilisant les touches pour diminuer et pour augmenter. La puissance utilisée est affichée dans la zone (L’intensité peut être divisée par 32, 16, 8, 4, 2 ou complète sur 1.

  • Page 29: Figure 3 : Gamme De Vitesse Du Joystick

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Appuyez dessus pour changer de gamme de vitesse. Chaque pression sur le sélecteur de vitesse permet de changer de gamme selon la figure ci-dessous. Lent Moyen Rapide Figure 3 : Gamme de vitesse du joystick ...

  • Page 30: Verification Du Microscope

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Vérification du Microscope Avant de commencer vos acquisitions, vérifiez l’état du microscope. Pour cela, suivez la procédure suivante : Zoom zone pointillée Les lettres indiquées ci-dessous correspondent aux lettres indiquées en vert sur le microscope.
  • Page 31 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E d. La vis micrométrique doit être sur « on ». La touche bleue doit être enfoncée. Zoom zone pointillée Photo(s) 11 : Vérification vis micrométrique e. Le réticule de visé (rectangle et croix de centrage visible dans les oculaires) doit être Zoom zone pointillée...
  • Page 32 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E g. Vérifiez que l’analyseur n’est pas dans le trajet optique. Le support peut être soit complétement retiré soit mis en place sur la position « OUT ».

  • Page 33: Nstallation De Lechantillon

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Installation de l’échantillon Avant de sortir vos échantillons, allumez une ou des lampes de bureau et éteignez l’éclairage principal de la pièce. Chaque lampe de bureau est équipée d’un variateur d’intensité. Utilisez le variateur pour ajuster la luminosité en fonction de vos besoins.

  • Page 34: Manipulation Du Statif Pour L'installation De L'échantillon

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Manipulation du statif pour l’installation de l’échantillon 4. Basculez délicatement la tête du statif vers l’arrière. Photo(s) 19 : Bascule de la tête du statif 5. Si un porte-objet est déjà monté sur la platine, retirez-le délicatement en le tirant vers le haut (saisissez-le comme indiqué...

  • Page 35: Objectifs Secs Et Objectifs À Immersion

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Objectifs secs et objectifs à immersion 9. Si vous avez choisi un objectif sec (4x, 10x ou 20x) passez directement à l’étape suivante. Si vous avez choisi un objectif à immersion huile (40x ou 100x), déposez une petite goutte d’huile avec le plat du pinceau sur la lentille de l’objectif.
  • Page 36 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 11. Posez le 1 côté de votre lame, avec la lamelle en dessous, entre les picots à droite du ressort que vous tirez. Photo(s) 24 : Etape 2 – Installation lame ème...

  • Page 37: Mise En Place Du Porte-Objet Sur La Platine

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Mise en place du porte-objet sur la platine 13. Localisez le ressort de maintien sur la platine sans porte-objet. Le cadre en pointillés blanc indique le ressort de maintien du porte-objet (Voir Photo(s) 26 ci-après).
  • Page 38 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 17. Posez votre index gauche sur le côté gauche et votre index droit sur le côté droit du porte-objet puis appuyez vers le bas pour terminer l’enclenchement.

  • Page 39: Utilisation Dun Exemple

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E INFORMATION Utilisation d’un exemple Afin de comprendre plus facilement les procédures suivantes, nous utiliserons un exemple concret. Description de l’exemple Pour réaliser les images nous nous appuierons sur l’échantillon suivant intitulé « Lame de démo » : ...

  • Page 40: Connaitre Ses Fluorochromes

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Connaître ses fluorochromes Afin d’utiliser efficacement le microscope en mode épifluorescence, il est indispensable de bien connaître les fluorochromes utilisés pour marquer votre échantillon. Les informations indispensables à connaître sont les spectres d’excitation et d’émission des fluorochromes présents dans votre échantillon.

  • Page 41: Copie(S) D'écran 6 : Spectres Des Fluorochromes

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Copie(s) d'écran 6 : Spectres des fluorochromes Légende : En pointillés : Spectre d’excitation A – Exemple Pic d’excitation En continu : Spectre d’émission B – Valeurs des coordonnées sous le pointeur de la souris 4.

  • Page 42: Copie(S) D'écran 7 : Information Configuration

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Pour connaître les caractéristiques des configurations enregistrées, survolez simplement le nom de la configuration (voir copie d’écran-ci-contre) dans la barre des configurations du logiciel Vous pouvez aussi préparer votre session et identifier les configurations à utiliser avant de venir sur la Plate-Forme en vous rendant à...

  • Page 43: Réalisation De La Mise Au Point Et Visualisation Par L'intermédiaire Des Oculaires

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Réalisation de la mise au point et visualisation par l’intermédiaire des oculaires Suite à l’installation de l’échantillon sur le microscope ou à un changement d’objectif, les objectifs sont pour le moment descendus au maximum.

  • Page 44: Mise Au Point Avec Un Objectif À Immersion Huile

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Mise au point avec un objectif à immersion huile Si vous utilisez l’objectif 40x ou 100x, vous devez réaliser les étapes A, B et C suivantes avant de continuer.

  • Page 45: Copie(S) D'écran 9 : Onglet Te-2000 Pad - Section Illuminator

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 9/A. Ajustez l’intensité de la lampe halogène pour ne pas être ébloui quand vous regarderez dans les oculaires. Pour ajuster l’intensité de la lampe halogène, utilisez le curseur « Intensity » dans l’onglet « TE-2000 Pad »...

  • Page 46: Mise Au Point En Fluorescence

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Mise au point en fluorescence 7/B. Dans la barre de configuration du logiciel , cliquez sur la configuration [Cube DAPI] ou [Cube GFP] ou [Cube TRITC] en fonction de vos besoins...
  • Page 47 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E  Attention : Lors de la mise au point veillez à ne pas aller trop haut avec les objectifs. Si vous allez trop haut, vous risquez de soulever ou déboiter le porte-objet voire casser votre lame.

  • Page 48: Acquisitions Simples Et Enregistrement Des Images

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Acquisitions simples et enregistrement des images Après la mise au point de votre préparation, vous pouvez visualiser votre échantillon directement sur le poste de pilotage et réaliser une prise de vue grâce à l'utilisation de la caméra.

  • Page 49: Copie(S) D'écran 12 : Image « Live » Avec Description Des Icônes

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E B C D E Copie(s) d'écran 12 : Image « Live » avec description des icônes Légende : Icône d’enregistrement Icône de réduction/agrandissement de la zone image Icône «...

  • Page 50: Affichage Des Pixels Saturés

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 7- Ajustez si besoin le temps d’exposition :  Vous pouvez tout d’abord cliquer sur l’icône « Auto Exposure » dans l’onglet « Coolsnap HQ2 Settings » pour avoir une estimation du temps d’exposition.

  • Page 51: Copie(S) D'écran 14 : Optimisation Du Temps D'exposition

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Copie(s) d'écran 14 : Optimisation du temps d’exposition 8- Une fois le temps d’exposition ajusté, coupez dès que possible le shutter de la lampe fluo en appuyant de nouveau sur la touche «...

  • Page 52: Acquisition Simple D'images

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Acquisition simple d’images Pour faire des acquisitions d’images, assurez-vous d’avoir suivi l’ensemble des étapes de la section Observation de l’échantillon par l’intermédiaire de la caméra à partir de la page 40. Ensuite : 1- Vérifiez que le port caméra Photometrics Coolsnap HQ ( «...

  • Page 53: Enregistrement D'images Simples

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 7- Vérifiez que le shutter s’est bien fermé suite à la capture. Si non, coupez-le coupez dès que possible sur la touche « Shutter » de la télécommande « Intensilight »...

  • Page 54: Copie(S) D'écran 17 : Enregistrement Des Images - Sous Dossier

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Copie(s) d'écran 17 : Enregistrement des images – Sous dossier 5- Ouvrez le sous dossier avec la date du jour. 6- Nommez votre image dans le champ « Nom du fichier » : Copie(s) d'écran 18 : Enregistrement des images –...

  • Page 55: Acquisitions Manuelles D'images Multicanaux

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Copie(s) d'écran 20 : Enregistrement des images – « TIF Compatibility Option » 10- Enfin, cliquez sur l’icône « Enregistrer » Votre image est maintenant enregistrée. Acquisitions manuelles d’images multicanaux Pour enregistrer différents canaux d’un même champ, la solution la plus simple est de répéter pour chaque canaux...
  • Page 56 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Version 2.2 |  Service Commun de Microscopie...

  • Page 57: Experiences

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Automatisations et création d’expériences Logiciel NIS-Element vous permet d’automatiser vos acquisitions et de créer des expériences plus ou moins complexes. Pour cela, vous devez utiliser l’onglet « ND Acquisition ».

  • Page 58: Acquisition Automatique D'images Multicanaux

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Acquisition automatique d’images multicanaux L’automatisation de l’acquisition des images multicanaux pourra vous faire gagner un temps précieux. En effet, au lieu de faire l’acquisition puis l’enregistrement pour chaque canal, vous pourrez le faire pour tous les canaux en une fois.

  • Page 59: Copie(S) D'écran 23 : Paramétrage D'automatisation D'acquisition Multicanaux

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Copie(s) d'écran 23 : Paramétrage d’automatisation d’acquisition multicanaux (Les numéros correspondent aux étapes de cette procédure) 11- Laissez toutes les autres cases case de l’onglet « ND Acquisition » décochées.

  • Page 60: Copie(S) D'écran 24 : Onglet « Nd Acquisition » Après Paramétrage Pour Automatisation D'acquisition Multicanaux

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Copie(s) d'écran 24 : Onglet « ND Acquisition » après paramétrage pour automatisation d’acquisition multicanaux selon les canaux à acquérir pour notre exemple 12- Vérifiez et réajustez le focus si besoin en utilisant la vis micrométrique (pensez à fermer le shutter quand vous avez terminé)

  • Page 61: Copie(S) D'écran 25 : Onglets De Superposition Et De Canal Individuel

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 17- Cliquez sur le petit onglet d’image « All » en dessous de l’image pour afficher tous les canaux ou sur les onglets portant le nom des canaux...

  • Page 62: Acquisition Semi-Automatique D'images Multicanaux

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 18- Cliquez sur l’onglet « All » puis enregistrez votre image comme indiqué au paragraphe Enregistrement d’images simples à partir de la page 45. Vous pouvez ensuite changer de champ puis répéter les opérations 12 à 18.

  • Page 63: Copie(S) D'écran 27 : Icône « Capture » De La Fonction « Capture Channel Manually

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 5- Dans le haut de la fenêtre, cliquez sur l’icône « Capture » pour (voir copie d’écran ci-dessous) déclencher l’acquisition de ce canal. Copie(s) d'écran 27 : Icône « Capture » de la fonction « Capture Channel Manually »...

  • Page 64: Réalisation De Z-Stack

    100x Sur le Microscope Epifluorescence 2 – Nikon Eclipse TE- 2000 , c’est la tourelle d’objectifs qui est motorisée en Z. Ce sont donc tous les objectifs qui montent et descendent en même temps.

  • Page 65: Etapes Initiales Pour Faire Le Z-Stack

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Etapes initiales pour faire le z-stack Pour réaliser un Z-stack, suivez la procédure suivante : 1- Suivez les étapes 1 à 12 du paragraphe Acquisition automatique d’images multicanaux à partir de la page 50.

  • Page 66: Suite Du Z-Stack En Mode « Define Top And Bottom

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Suite du Z-stack en mode « Define top and bottom » Le mode « Define top and bottom » permet de définir manuellement avec la vis micrométrique (ou la mollette de la souris si la fonction est activée) les bornes hautes et basses du z-stack.

  • Page 67: Copie(S) D'écran 32 : Top Et Bottom Enregistrés

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 17- Cliquez sur l’icône « Bottom » pour enregistrer la position. Copie(s) d'écran 32 : Top et bottom enregistrés  A savoir / Notez-bien : Pour s’assurer de collecter toute l’information en z de l’échantillon, vous pouvez définir le haut et le bas de votre échantillon en les dépassant comme indiqué...

  • Page 68: Copie(S) D'écran 33 : Icône « Order Of Experiment

    22- Une fois l’acquisition terminée, si l’option « Save to file » a bien été cochée, l’image s’enregistre automatiquement au format .ND2 (Format Nikon) dans le dossier que vous avez préalablement choisi. 23- L’image enregistrée s’affiche automatiquement dans le logiciel.

  • Page 69: Copie(S) D'écran 35 : Z-Stack Final

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Copie(s) d'écran 35 : Z-stack final 24- Vérifiez que le shutter s’est bien fermé suite à la capture. Si non, coupez-le coupez dès que possible sur la touche «...

  • Page 70: Les Autres Options Pour La Réalisation De Z-Stack

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Les autres options pour la réalisation de Z-Stack La méthode ci-dessus décrit les étapes pour réaliser un Z-stack en définissant le haut (top) et le bas (bottom) de l’échantillon.
  • Page 71 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 6- Dans le champ « Step  µm» (en dessous de l’icône « bottom » grisée), entrez la valeur de l’intervalle que vous souhaitez entre chaque image.

  • Page 72: Copie(S) D'écran 39 : Meilleur Plan Focal

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Copie(s) d'écran 39 : Meilleur plan focal 5- Dans le sous onglet « Z », cliquez sur pour enregistrer cette position. 6- Dans le champ « Step  µm» (en dessous de l’icône « bottom » grisée), entrez la valeur de l’intervalle que vous souhaitez entre chaque image.

  • Page 73: Les Images Z-Stacks

    Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Les images Z-stacks Suite à la réalisation de votre stack, vous obtenez un fichier .ND2 (Format d’image Nikon). Ce fichier comprend toutes les images qui composent le stack. A B C Copie(s) d'écran 40 : Fenêtre Z-Stack...

  • Page 74: Vue Principale

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Vue Principale La vue affichée directement après l’acquisition d’un z-stack est la vue principale (Point ). Cette vue montre la superposition de tous les canaux qui composent l’image.

  • Page 75: Vue « Orthogonale

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Vue « Orthogonale » La vue orthogonale permet d’afficher des vues en coupe X-Y, X-Z et Y-Z du z-stack. Coupe en XY Axe de coupe en X...

  • Page 76: Vue 3D

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Pour afficher cette vue, cliquez sur l’icône « Orthogonal View » (Point Vous pouvez cliquer à n’importe quel endroit de toutes les images (coupe en X-Y, en X-ZY et Y-Z) pour déplacer la zone de croisement des axes de coupe .

  • Page 77: Galerie D'images

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Galerie d’images Vous pouvez visualiser sur une seule planche, toutes les images qui composent votre stack. Pour cela, cliquez sur l’icône « Show Tiled View » (Point Copie(s) d'écran 44 : Galerie d’images...
  • Page 78 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E La projection maximum projette les images en comparant l’intensité de chaque pixel en z. Seul le pixel le plus intense est retenu sur la projection. Le schéma ci-dessous représente un stack de 4 images. Chaque image est composée de 4 pixels (pixel A,1 – A,2 – B,1 –...

  • Page 79: Les Images Au Format .Nd2

    Solution 1 Cette solution est adaptée pour visualiser vos images. En revanche, pour analyser vos images, utilisez la solution 2. Pour visualiser vos images .ND2, téléchargez et installer le logiciel gratuit « Nikon NIS Viewer » disponible à cette adresse : https://www.nikoninstruments.com/en_EU/Products/Software/NIS-Elements-Advanced-Research/NIS-Elements-...

  • Page 80: Solution 2

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Solution 2 Cette solution est adaptée pour visualiser, traiter et analyser vos images. Pour visualiser, traiter et analyser vos images .ND2 (ou autre) téléchargez et installez le logiciel gratuit « ImageJ »...

  • Page 81: Changer D'objectif Au Cours De La Session

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Changer d’objectif au cours de la session Si vous souhaitez changer d’objectif pendant la session, suivez la procédure suivante correspondant à votre cas : Passage d’un objectif sec à un autre objectif sec Les objectifs secs sont les suivants : 4x, 10x et 20x.

  • Page 82: Passage D'un Objectif Sec À Un Objectif À Immersion

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Passage d’un objectif sec à un objectif à immersion Les objectifs secs sont les suivants : 4x, 10x et 20x. Les objectifs à immersion huile sont les suivants : 40x et 100x.
  • Page 83 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 7. Déposez une petite goutte d’huile avec le plat du pinceau sur la lentille de l’objectif à immersion que vous avez précédemment mis en place. Photo(s) 36 : Dépôt d’huile sur un objectif à immersion 8.

  • Page 84: Passage D'un Objectif À Immersion À Un Objectif Sec

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 10. Allumez la lampe halogène du microscope et réglez l’intensité de façon à visualiser un spot de lumière sur la lame. 11. Centrez votre échantillon dans le spot de lumière grâce au joystick x/y 12.
  • Page 85 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 3. Basculez délicatement la tête du statif vers l’arrière. Photo(s) 40 : Bascule de la tête du statif 4. Enlevez votre lame du porte-objet (vous pouvez laisser le porte-objet sur la platine pour réaliser cette étape).
  • Page 86 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E = 10x Sec – (JAMAIS D’HUILE SUR CET OBJECTIF) = 20x Sec – (JAMAIS D’HUILE SUR CET OBJECTIF) 8. L’objectif se met en place automatiquement. 9. Remontez votre lame sur le porte-objet en suivant la procédure du paragraphe Objectifs secs et objectifs à...

  • Page 87: Passage D'un Objectif À Immersion À Un Autre Objectif À Immersion

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Passage d’un objectif à immersion à un autre objectif à immersion Les objectifs à immersion huile sont les suivants : 40x et 100x. 1. Vérifiez que le shutter de la lampe fluo est bien fermé. Si non, coupez-le en appuyant sur la touche « Shutter »...
  • Page 88 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 6. Sélectionnez l’objectif à IMMERSION de votre choix en cliquant dans le logiciel (Zone F – Onglets de paramétrage – Onglet TE2000 Pad ) ou en appuyant sur la télécommande du microscope sur le numéro...
  • Page 89 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Photo(s) 46 : Remise en place de la tête du statif 11. Allumez la lampe halogène du microscope et réglez l’intensité de façon à visualiser un spot de lumière sur la lame.

  • Page 90: Changer De Lame Au Cours De La Session

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Changer de lame au cours de la session Si vous souhaitez changer de lame au cours de la session suivez les procédures suivantes : Si vous êtes sur un objectif sec Les objectifs secs sont les suivants : 4x, 10x et 20x.

  • Page 91: Si Vous Êtes Sur Un Objectif À Immersion

    Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 5. Montez votre nouvelle lame sur le porte-objet en suivant la procédure du paragraphe Objectifs secs et objectifs à immersion p.27 – Etapes 8 à 10). 6. Ramenez délicatement la tête du statif vers l’avant.
  • Page 92 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Photo(s) 51 : Bascule de la tête du statif 4. Enlevez votre lame du porte-objet (vous pouvez laisser le porte-objet sur la platine pour réaliser cette étape).
  • Page 93 Déroulement d’une session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 8. Remontez votre lame sur le porte-objet en suivant la procédure du paragraphe Objectifs secs et objectifs à immersion p.27 – Etapes 8 à 10). 9. Ramenez délicatement la tête du statif vers l’avant.

  • Page 94: Fin De Session

    Fin de session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 15. Faites vos nouvelles acquisitions. Fin de session Veuillez à respecter vos horaires de sessions. Pensez à garder du temps en fin de session pour réaliser les étapes de récupération des échantillons, nettoyage et arrêt de l’équipement si besoin.

  • Page 95: Copie(S) D'écran 47 : Planning De Réservation

    Fin de session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Copie(s) d'écran 47 : Planning de réservation S’il y a un utilisateur juste après vous (exemple le 17 juin ci-dessus) suivez la procédure de fin n°1. S’il y a 1 heure de libre ou plus entre vous et les suivants (exemple le 16,18 et 19 juin ci-dessus) ou si vous êtes le dernier utilisateur de la journée (exemple le 20 juin) suivez la procédure de fin n°2.

  • Page 96: Ans Arret De Lequipement

    Fin de session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Procédure de Fin n°1 – Sans arrêt de l’équipement Cette procédure est à suivre uniquement si : Il y a un utilisateur juste après vous. Après avoir correctement suivi les étapes du paragraphe Etapes initiales p.86 suivez la procédure suivante : 1.
  • Page 97 Fin de session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 3. Si vous étiez sur un objectif à immersion, nettoyez soigneusement l’objectif (sinon passez directement à l’étape 4) : a. Prenez un papier optique et pliez-le en 4.

  • Page 98: Rret Complet De Lequipement

    Fin de session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Procédure de Fin n°2 – Arrêt complet de l’équipement Cette procédure est à suivre uniquement si : Il y a 1 heure ou plus de libre entre vous et l’utilisateur suivant.
  • Page 99 Fin de session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E d. Enlevez votre lame du porte-objet (vous pouvez laisser le porte-objet sur la platine pour réaliser cette étape). Photo(s) 60 : Retrait lame 5. Si vous étiez sur un objectif à immersion, nettoyez soigneusement l’objectif (sinon passez directement à...
  • Page 100 Fin de session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 7. Arrêtez tous les modules du microscope : vue gauche vue droite 10 11 Direction Direction vue droite vue gauche Photo(s) 62 : Etapes d’arrêt du microscope Les numéros indiqués sur la photo ci-dessus correspondent aux numéros indiqués sur le microscope...
  • Page 101 Fin de session Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E 9. Nettoyez si besoin la platine avec un Kimtech imprégné d’alcool 50°. Vous pouvez aussi utiliser des lingettes imprégnées Wip’Anios disponibles dans le meuble bas blanc. 10. Nettoyez si besoin le bureau avec un Kimtech imprégné d’alcool 50°. Vous pouvez aussi utiliser des lingettes imprégnées Wip’Anios disponibles dans le meuble bas blanc.

  • Page 102: Procedures En Cas D'incident

    Procédures en cas d’incident Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Procédures en cas d’incident EN CAS D’URGENCE TECHNIQUE OU D’INCIDENT SUR UN EQUIPEMENT, RAPROCCHEZ VOUS IMMEDIATEMENT DU RESPONSABLE DE LA PLATE-FORME. EN CAS D’ABSENCE DU RESPONSABLE DE LA PLATE-FORME SUIVEZ LES PROCEDURES CI-DESSOUS.

  • Page 103: Procédure En Cas D'incident Equipement

    Procédures en cas d’incident Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Procédure en cas d’incident Equipement En cas d’incident sur un équipement, rapprochez-vous immédiatement du Responsable de la Plate-Forme. En cas d’absence du Responsable de la Plate-Forme Si vous rencontrez un problème lors de l’utilisation d’un équipement et que le Responsable de la Plate-Forme n’est...

  • Page 104: Table Des Illustrations

    Table des illustrations Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Table des illustrations Copies d’écran Copie(s) d'écran 1 : Le logiciel NIS-Element ........................10 Copie(s) d'écran 2 : Choix de la caméra .......................... 16 Copie(s) d'écran 3 : Fenêtre d’initialisation du logiciel ....................16 Copie(s) d'écran 4 : Ports d’envoi de la lumière –...
  • Page 105 Figure 7 : Projection maximum d’un stack........................70 Photos Photo(s) 1 : Vue d’ensemble du Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E ..........1 Photo(s) 2 : Roues de filtres .............................. 4 Photo(s) 3 : Etapes de démarrage du microscope ......................12 Photo(s) 4 : Télécommande de pilotage du microscope ....................
  • Page 106 Table des illustrations Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Photo(s) 25 : Etape 3 – Installation lame ........................28 Photo(s) 26 : Platine sans porte-objet ..........................29 Photo(s) 27 : Pose initiale du porte-objet sur la platine ....................29 Photo(s) 28 : Insertion du porte-objet sur la platine ......................
  • Page 107 Manuel d’Utilisation – Microscope Epifluorescence 1 – Nikon Eclipse TE-2000E Pour toute remarque ou suggestion concernant ce guide merci d’envoyer un e-mail à l’adresse suivante : scm@parisdescartes.fr  | Version 2.2 Service Commun de Microscopie...

Table des Matières