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COLORATION DU GEL ET VISUALISATION
1. Placez le gel dans un plateau de coloration.
2. Ajoutez la quantité appropriée de bromure d'éthidium 0,5 μg/ml. Voir la concentration
appropriée pour chaque substance à la fin du manuel.
3. Couvrez le plateau de coloration pendant environ 15-30 minutes.
4. Pour décolorer, plongez le gel dans de l'eau distillée pendant environ 10-30 minutes.
Encore une fois, assurez-vous que le gel est complètement immergé.
5. Rincez le gel à l'eau distillée pendant quelques secondes. Faites ceci deux fois.
6. Placez le gel dans un transilluminateur de lumière UV. Les échantillons apparaîtront sous
forme de bandes claires et définies.
Si les bandes sont trop floues, il y a eu trop de décoloration.
Si le fond est trop clair, il n'y a pas eu assez de décoloration.
SOLUTIONS
1x TAE
40Mm tris (pH 7.6), 20mM acide
acetique, 1mM EDTA.
50 x (1L) dissoudre dans 750 ml d'eau
distillée:
-242 g de base de tris (FW=121)
-57,1 ml d'acide acétique glacial
-100 ml di 0,5 M EDTA (pH 8,0)
Compléter avec de l'eau distillée
j'usqu'à 1 L.
Colorant de charge de l'échantillon
Le tampon de l'echantillon 10x se compose:
-50% de glyceról
-0,25% de bleu bromophénol
-0,25% di xylène cyanol FF dans un tampon
1XTAE.
Préparez seulement 1-10 ml de colorant de
charge 10x.
1xTBE
89mM tris (pH 7.6), 89Mm acide borique,
2mM EDTA.
10 x (1L) dissoudre dans 750 ml d'eau
distillée:
-108 g de base de tris(FW=121)
-55 g d'acide borique (FW=61.8)
-40 ml di 0,5 M EDTA (pH 8,0)
Compléter avec de l'eau distillée
j'usqu'à 1 L.
Solution de bromure d'éthidium
Ajoutez 10 mg de bromure d'éthidium à 1
ml d'eau distillée.
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