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19.6 Protocole de dosage
Ce test est un dosage immunoenzymatique sur membrane de nitrocellulose
(immunotransfert) destiné à la détection quantitative des anticorps IgE spécifiques à des
allergènes dans le sérum et le plasma humains (citrate).
Mode opératoire du test :
Le mode opératoire du test est conçu pour 36 membranes installées dans le RIDA
qLine® autoBlot.
1
Laisser les membranes, les réactifs et les sérums de patient s'équilibrer à température
ambiante (20 - 25 °C). Agiter les réactifs avant utilisation.
2
Transférer les 5 mL de tampon de lavage concentré Wash 25x de 4 kits dans le
réservoir de tampon de lavage du RIDA qLine® autoBlot et remplissez-le jusqu'à
500 mL avec de l'eau distillée (= tampon de lavage). Toutes les étapes d'incubation
doivent être effectuées à température ambiante (20 - 25 °C).
3
400 µL de tampon de lavage sont distribués sur les membranes, qui sont ensuite
incubées pendant 1 minute sous agitation. Après incubation, le tampon de lavage
est aspiré pendant que les membranes sont inclinées vers l'arrière.
4
400 µL de sérum de patient sont distribués sur les membranes, qui sont ensuite
incubées pendant 30 minutes dans l'agitateur. Après incubation, le sérum est aspiré
pendant que les membranes sont inclinées vers l'arrière.
5
400 µL de tampon de lavage sont distribués sur les membranes, qui sont ensuite
incubées pendant 1 minute sous agitation. Cette étape est répétée 3 fois au total.
6
400 µL d'anticorps sont distribués à chaque membrane, avant incubation dans
l'agitateur orbital pendant 45 minutes. Après incubation, l'anticorps est aspiré
pendant que les membranes sont inclinées vers l'arrière.
7
Le lavage est exécuté comme décrit au point 5.
8
400 µL de conjugué sont distribués à chaque membrane, avant incubation dans
l'agitateur orbital pendant 20 minutes.
65
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